b型流感嗜血杆菌多糖竞争elisa检测方法的建立

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1、卫生与病伤2013年1O月第28卷第5期JournalofOccupationalHealthandDamage．Oct．2013Vo1．28．No．5293【论著】b型流感嗜血杆菌多糖竞争ELISA检测方法的建立江山，刘威，兰芳，廖红梅，李小波，张立平，崔长法[摘要]目的建立竞争酶联免疫吸附分析法(Enzyme—LinkedImmunosorbentAssay，ELISA)，测定b型流感嗜血杆菌多糖(PRP)浓度。方法以b型流感嗜血杆菌多糖一酪胺(Ty)为包被抗原，待测多糖为竞争抗原，与优化的抗b型流感嗜血杆菌多糖抗体反应，建立标准曲线

2、，并验证该方法的准确性和精密度。结果优化后的b型流感嗜血杆菌多糖一酪胺包被浓度为1：400倍稀释，抗多糖血清稀释度为1：40K。检测线性范围6．25t~g／ml～100~g／ml，最低检测限为3．13~g／ml，回归方程为B／B。=一34．328[PRP]+105．03，线性相关系数为R=0．995。批内精密度为3．4％一6．5％，批间精密度为8．48％，测定培养基中b型流感嗜血杆菌多糖的回收率为95．7％。结论本研究建立的b型流感嗜血杆菌多糖竞争ELISA方法准确性和精密性均较好，可以特异性地检测b型流感嗜血杆菌多糖浓度。[关键词]b型

3、流感嗜血杆菌多糖；免疫学检测法；竞争ELISA[中图分类号]R446．6[文献标识码]A[文章编号]1006-172X(2013)05—293—04CompetitiveELISAMethodforDeterminingHaemophilusInfluenzaTypebP0lysaccharideJIANGShan，LIUWei，LANFang，LIAOHong—mei，LIXiao—bo，ZHANGLi—ping，CUIChang—faChengduInstituteofBiologicalProduct，Co．，Ltd，Chengdu

4、610023，SichuanProvince，China．Abstract0bjectiveTodevelopcompetitiveELISAmethodfordeterminingtheconcentrationofhaemophilusinfluenzatypebpolysaecharide(PRP)．MethodsPRP—Tywassetascoatingantigenandpoliasecharideascompetitionantigen，comparisonweremadebetweenthetworeactionsagain

5、stantiseraofhaemophilusinfluenzatypeb．Theaccuracyandprecisionofthemethodwerevalidatedaccordingly．ResultsTheoptimalcoatingconcentrationofPRP—Tyandserumdilutionfactorwas1：400．and1：40Krespectively．QuantitationofPRPconcentrationwaslinearfrom6．25ug／ml一100ug／ml，withlowerlimitof

6、detectionbeing3．13ug／m1．TheregressionequationwasB／Bo=一34．328[PRP]+105．03withRSQ=0．995．Thecoeficientofvariationofintra—assayandinter—assaywas3．4％一6．5％and8．48％respectively．TherecoveryrateofPRPinculturemediumwas95．7％．ConclusionThecompetitiveELISAmethodshowedbothhighaccuracya

7、ndprecision，andthusvallbeusedfordetectionofhaemophilusinfluenzatypebpolysaccharide．Keywordshaemophilusinfluenzatypebpolysaccharide；immunoassay；competitiveenzyme—linkedimmunosorbentassaV流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenza，Hi)迄今分由b型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzatype仍是导致人类侵袭性疾病的主要致病菌，其

8、中绝大部b)引起，是婴幼儿脑膜炎、肺炎和败血症的主要致病菌。Hib荚膜是由脂多糖和荚膜多糖组成，其主要成作者单位：成都生物制品研究所责任有限公司(成都分是多聚核糖基核糖醇磷酸盐(polyrib