细菌总rna提取方法的比较_邹晓蕾

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1、现代食品科技ModernFoodScienceandTechnology2013,Vol.29,No.8细菌总RNA提取方法的比较邹晓蕾，刘礼崔，罗立新（华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006）摘要：采用改良前后的Trizol法，RNAisoplus法、Qiagen试剂盒法以及TritonX-100法，从大肠杆菌（Escherichiacoli），枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis），乳酸乳球菌（Lactococcuslactis）3株细菌中提取RNA。用琼脂糖凝胶电泳和核酸浓度测定仪检测总

2、RNA的提取质量，并用RT-PCR（ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction）对RNA的质量进行验证。结果表明：RNAisoplus法对3株菌的总RNA提取均有很好的效果。Trizol法和Qiagen试剂盒法对于E.coli总RNA的提取效果不错，但对其他2株菌的提取效果均不明显，并且都伴有DNA污染。上述几种方法提取出的RNA样品中均含有23S和16SrRNA。L.lactis更适合用TritonX-100法提取总RNA。改良后的Trizol法和RNAisoplus法与

3、TritonX-100法的原理基本相同，都是采用加热的方法，更彻底地裂解细菌细胞，而且得到的RNA中不含有rRNA和tRNA，只保留了mRNA，能更好地用于后续的实验研究。关键词：细菌；总RNA提取；反转录聚合酶链式反应文章篇号：1673-9078(2013)8-1948-1954ComparisonofDifferentMethodsforTotalBacteriaRNAextractionZOUXiao-lei,LIULi-cui,LUOLi-xin(CollegeofBioscience&Bioengineer

4、ing,SouthChinaUniversityofTechnology,Guangzhou510006)Abstract:Inthisresearch,RNAwasisolatedfromthreebacterialstrains,(Escherichiacoli,BacillussubtilisandLactococcuslactis)byusingmodifiedandun-modifiedTrizolandRNAisoplusmethods,TritonX-100methodandQiagenmethod.T

5、hequalityandintegrityoftheextractedRNAsamplesweredeterminedwithagarosegelelectrophoresis,nucleicaciddetectorandRT-PCRdetection.Theresultsdemonstratethatun-modifiedRNAisoplusmethodcaneffectivelycollecthigh-qualityRNAfromthethreebacterialstrains.Qiagenmethodandun

6、-modifiedTrizolmethodshowedgoodefficiencywhenisolatingtotalRNAfromE.colibutotherstrains.Inaddition,theRNAsamplesalsocontainDNAcontamination.L.lactiswasmoresuitableforusingTritonX-100method.Withthesameprinciple,modifiedTrizolmethod,modifiedRNAisoplusmethodandTri

7、tonX-100methodreportedherecanbeemployedforextractionofRNAthatarefreefrom16Sand23SrRNAandprovidesimple,rapidandeffectivetoolsfortheisolationofhigh-qualityRNAappropriatefordownstreammolecularexperimentsKeywords:bacteria;tatalRNAextraction;RT-PCRRNA是生物体重要的遗传物质，RNA

8、的提取是Trizol总RNA抽提试剂盒；Omega公司的细菌RNA分子生物学的基础实验，对于cDNA文库构建、荧光小量提取试剂盒（BacteriaRNAkit）以及高纯RNA定量PCR、RT-PCR、Northern杂交等下游分子生物学抽提试剂盒（HPtotalRNAkit）；Qiagen公司的RNeasy[1]实验来说，都需要质量好的，完整性