ctx-m-38型超广谱β-内酰胺酶快速检测方法的建立

《ctx-m-38型超广谱β-内酰胺酶快速检测方法的建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、·66·郑州大学学报(医学版)2014年1且第49鲞筮塑doi：10．3969／j．issn．1671·6825．2014．01．018CTX-M-38型超广谱I3}一内酰胺酶快速检测方法的建立郭小兵△，代志峰，宋海容，张傅山，叶亚菲，明亮郑州大学第一附属医院检验科郑州450052△男，1971年8月生，博士，副教授，研究方向：细菌耐药机制，E—mail：gxbing928@126．corn关键词CTX—M．38；超广谱B一内酰胺酶；酶联免疫吸附实验中图分类号R392摘要目的：建立一种CTX．M．38型超广谱B．内酰胺酶(E

2、SBLs)的快速检测方法。方法：采用梅花形双向琼脂扩散实验检测酶蛋白与抗体反应最适比；根据双抗体夹心法原理设计酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒；平行测定3O次BL21．pET-28a．CTX．M．38转化子表达产物，检测批内变异；分别采用所建立的ELISA法与PCR技术对146株产ESBLs大肠埃希菌进行检测，评价方法特异性；对27株非产CTX—M．38型产酶大肠埃希菌进行检测，计算假阳性率；对产CTX．M一38型ESBLs菌株不同时间段培养液进行检测，明确最适检测时间。结果：抗体与4h培养物反应最适比为1：64；批

3、内检测结果变异系数为1．525％；PCR及所建立的ELISA法检测产CTX-M一38型ESBLs菌株的检出率分别为4．11％和7．53％(=2．286，P=0．131)；交叉反应中存在假阳性现象(1／27)；产酶菌株培养4h后进行ESBLs检测较为合适。结论：所建立的方法适用于临床产CTX—M一38型ESBLs菌株的检测。EstablishmentofaquickdetectionmethodofCTX--M--38typeESBLsGUOXiaobing，DAIZhifeng，SONGHairong，ZHANGFushan

4、，YEYafei，MINGLiangClinicalLaboratory，theFtAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052KeywordsCTX—M一38；ESBLs；ELISAAbstractAim：ToestablishaquickdetectionmethodofCTX—M-38typeESBLs．Methods：ThereactionoptimalratiobetweenCTX—M一38typeESBLsandpolyclonalantibodyw

5、asConfirmedbydoubleagardiffusiontest．TheELISAkitwasdesignedaccordingtodouble—antibodysandwichprinciple．TheproductsofCTX—M一38transformantweredetected30timestoobtaintheinformationofexperimentalrepeatabilityandintraassayvariation；146ESBLs—producingE．colistrainsweredet

6、ectedbyPCRandthedesignedmethodrespectivelytoevaluatetheexperimentalspecificity；27isolatesofESBLs—producingE．colistrains(notcarryingCTX—M-38typeESBLs)weredetectedtoevaluatetheexperimentalcross—reactivity；theculturemediumofCTX-M一38typeESBLs—producingE．coliwasdetected

7、atvarioustimetoconfirmtheoptimaldetectivetimeofESBLs．Results：ThereactionoptimalratiobetweenCTX—M一38typeESBLsandpolyclonalantibodywas1：64；theresultsoftheparalleltestingindicatedthattheCVwas1．525％：thedetectionrateofPCRandELISAwas4．11％and7．53％(=2．286，P=0．131)；thedesig

8、nedELISAmighthavethephenomenonoffalse—positivity(1／27)；theoptimaldetectiontimeforESBLswasbeingculturedfor4h．Conclusion：TheestablishedELISAcanmeet