奶山羊骨髓间质干细胞的分离培养及生物学特性研究.pdf

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1、第３８卷第１０期西北农林科技大学学报（自然科学版）Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．１０２０１０年１０月ＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）Ｏｃｔ．２０１０奶山羊骨髓间质干细胞的分离培养及＊生物学特性研究王芳１，朱海鲸１，李伟２，华进联１（１西北农林科技大学动物医学院，陕西省干细胞工程技术研究中心，农业部动物生殖发育与胚胎工程重点开放性实验室，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌７１２１００；２江苏省北科生物科技有限公司，江苏泰州２２５３００）［摘要］【目的】分离、培养奶山羊骨髓间质干

2、细胞（ＭＳＣｓ），探讨其生物学特性，为心血管、神经退化，尤其是不育症患者的细胞移植治疗及相关细胞发育分化研究奠定基础。【方法】采用贴壁培养法进行ＭＳＣｓ的分离和培养，通过形态学观察、生长曲线测定、免疫细胞化学染色和ＲＴ－ＰＣＲ技术等进行检测；并采用免疫细胞化学法对自发分化的细胞及定向诱导分化的神经样细胞、心肌样细胞、生殖样细胞进行检测，计算生殖样细胞的阳性率。【结果】分离得到的ＭＳＣｓ为成纤维样细胞，其增殖能力强，无致瘤性，已连续传代至２２代；其表达胚胎干细胞（ＥＳＣｓ）的表面标记Ｏｃｔ４、Ｎａｎｏｇ、Ｃ－ｍｙｃ和ＴＥＲＴ；

3、ＭＳＣｓ形成类胚体自发分化的细胞表达３胚层特异标志基因ＡＦＰ、β－ⅢＴｕｂｕｌｉｎ和心肌α－ａｃｔｉｎ；ＭＳＣｓ经β－巯基乙醇诱导，定向分化为表达Ｎｅｓｔｉｎ和β－ⅢＴｕｂｕｌｉｎ的早期神经样细胞，经５－氮胞苷（５－Ａｚａ）诱导，可定向分化为表达ＣＴ３及心肌α－ａｃｔｉｎ的心肌样细胞，并出现肌管样结构，经维甲酸（ＲＡ）诱导，分化的细胞表达生殖细胞减数分裂前期的蛋白Ｖａｓａ、Ｓｃｐ３和ＣＤ４９ｆ（α６整合素）等生殖细胞标记，其阳性率分别达到３５．７％，２４．０％和１４．０％。【结论】自奶山羊骨髓分离得到ＭＳＣｓ，其具备间质干细

4、胞的基本特性，并具有向神经细胞、心肌细胞、生殖细胞分化的潜能。［关键词］奶山羊；骨髓；间质干细胞；神经细胞；心肌细胞；生殖细胞［中图分类号］Ｓ８２７．３＋６［文献标识码］Ａ［文章编号］１６７１－９３８７（２０１０）１０－００１９－０８Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｄｉａｒｙｇｏａｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ１，ＺＨＵＨａｉ－ｊｉｎｇ１，ＬＩＷｅｉ２，ＨＵＡＪｉｎ－ｌｉａｎ１ＷＡＮＧＦａｎｇ（１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ

5、，ＳｈａａｎｘｉＣｅｎｔｒｅｏｆＳｔｅｍＣｅｌｌｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＫｅｙＬａｂｆｏｒＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ＆ＥｍｂｒｙｏＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＣｈｉｎａ，ＳｈａａｎｘｉＫｅｙＬａｂｆｏｒＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｒｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ７１２１００，Ｃｈｉｎａ；２ＮｏｒｔｈＢｒａｎｃｈＢｉｏ－ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ，

6、ＬｔｄｏｆＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｅ，Ｔａｉｚｈｏｕ，Ｊｉａｎｇｓｕ２２５３００，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅｄｉａｒｙｇｏａｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗ－ｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ＭＳＣｓ）ｗｅｒｅｉｓｏ－ｌａｔｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｏｄｅｌｆｏｒｃｅｌｌｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｎｄｔｏｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｒｅ－ｓｏｕｒｃｅｓｏｆｃｅｌｌｔｈｅｒａｐｙｆｏｒｎｅｕｒａｌａｎｄｍｙｏｃａｒｄ

7、ｉａｌｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅｓ，ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙａｎｄｓｔｅｒｉｌｉｔｙ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｄａｉｒｙｇｏａｔｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｂｙａｄｈｅｒｅｎｔｃｕｌｔｕｒｅ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｍｏｒ－ｐｈｏｌｏｇｙ，ｇｒｏｗｔｈｃｕｒｖｅｓ，ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＲＴ－ＰＣＲ．Ｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｓｏｆｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａ－ｔｉｏｎｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｃ

8、ｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄ．【Ｒｅｓｕｌｔ】ＴｈｅｉｓｏｌａｔｅｄＭＳＣｓｗｅｒｅｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ－ｌｉｋｅｐｈｅｎｏｔｙｐｅｗｉｔｈｏｕｔｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙａｎｄｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｌｙｐａｓｓａｇｅｄｔｏ２２；Ｔｈｅｍａｒｋｅｒｓｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅ