重组葡激酶-水蛭素融合蛋白质控方法和质量标准的建立-论文.pdf

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1、·1024·中国生物制品学杂志2014年8月第27卷第8期ChinJBioIogicalsAugust2014，V01．27No．8治疗性制剂重组葡激酶一水蛭素融合蛋白质控方法和质量标准的建立丁有学，韩春梅，李响，毕华，史新昌，饶春明中国食品药品检定研究院重组药物室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京100050摘要：目的建立注射用重组葡激酶(staphylokinase，SAK)一水蛭素(hirudin，HV)融合蛋白(SFH)的质控方法和质量标准。方法采用纤维蛋白平板溶圈(fib

2、rinagaroseplateassay，FAPA)法测定SFH的溶栓比活性，纤维蛋白凝块溶解法测定SFH的抗凝比活性；还原型SDS．PAGE测定SFH的相对分子质量；非还原SDSPAGE和反相高效液相色谱(reversed—phasehigh-performanceliquidchromatography，RP—HPLC)测定SFH的纯度；胰酶裂解后采用RP—HPLC法分析SFH的肽图；其他各项指标的检测按《中国药典》三部(2010版)规定进行。结果用建立的方法对SFH原液和成品进行检定，各项指标

3、均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和《中国药典》三部(2010版)的要求。结论建的质控方法和质量标准能够保证产品安全、有效、质量可控，可用于注射用SFH产品的常规检定。关键词：重组葡激酶一水蛭素融合蛋白(SFH)；质量控制中图分类号：Q789文献标识码：A文章编号：1004—5503(2014)08．1024—06DevelopmentofmethodsandstandardsforqualitycontrolofrecombinantstaphylOkinase-hirudinfus

4、ionproteinDINGYou-xue，HANChun—mei，LIXiang，BIHua，SHIXin—chang，RAOChun—mingDepartmentofBiopharmaceuticals，NationalInstitutesforFoodandDrugControl，KeyLaboratoryoftheMin~tryofHealthforResearchonQualityandStandardizationofBiotechProducts，Beijing100050，China

5、Correspondingauthor：RA0Chun-ming，E—mail：raocm@nicpbp．org．cnAbstract：ObjectiveTodevelopthemethodsandstandardsforqualitycontrolofrecombinantstaphylokinase—hirudinfusionprotein(SFH)forinjection．MethodsSFHwasdeterminedforthrombolyticactivitybyfibrinagarpla

6、teassay(FAPA)，foranticoagulantactivitybyclotdissolutionmethod，forrelativemolecularmassbyreducedSDS—PAGE，andforpuritybynon·reducedSDS—PAGEandreversed—phasehigh—performanceliquidchromatography(RP—HPLC)，thensubjectedtopeptidemappingbyRP—HPLCafterdigestion

7、withtrypsin．OthercontroltestswerecarriedoutaccordingtotherequirementsinChinesePharmacopoiea(VolumellI，2010edition)．ResultsControltestswereperformedonthebulkandfinalproductofSFHbythedevelopedmethods，andtheresultshowedthatalltheindexesmettherequirementsi

8、nChinesePharmacopoiea(Volume11，2010edition)．ConclusionThedevelopedmethodsandstandardsensuredthesafety，eficiencyandcontrollablequalityofSFH，andmightbeusedfortheroutinequalitycontrolofSFH．Keywords：Staphylokinase—himdinfusionprotein(SFH)；Q