细胞传代标准化步骤.doc

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1、细胞传代标准化流程：穿戴好白大褂和手套，用75%酒精擦手；1、取出细胞，显微镜下观察细胞形态和密度，确定细胞生长状况，是否需要传代或换液；2、将培养基（如有需要还有血清和大瓶高糖培养基）、PBS、胰酶培养基等预热及超净台消毒结束后，将试剂及细胞等喷酒精后移入超净台，将废液缸喷足酒精移入超净台，取酒精棉放入超净台；3、点燃酒精灯，将瓶口拧松，过火消毒；4、在确定细胞生长状况良好且没有污染的情况下，将培养皿中的培养基取（大培养皿6ml，中培养皿3ml）至一个新的15ml离心管中；（一个1ml枪头）5、用适量PBS清洗细胞表面（大皿5ml，中皿3ml），并弃去P

2、BS；（一个5ml枪头）6、加入适量胰酶消化细胞（大皿1ml，中皿0.5ml），此时可将细胞置于37°C细胞培养箱内消化；（C2C12用5min，3T3-L1用1.5min），（一个1ml枪头）7、待消化完全后，用胰酶6倍体积的完全培养基中止消化，并吹打培养皿皿底，将细胞移入离心管；（一个5ml枪头）8、1000rpm，5min离心，离心间隙可以准备好传代的细胞培养皿，并加好培养基；9、弃上清，口擦酒精，烧口；10、加适量完全培养基吹打混匀细胞(沿壁轻轻吹打24次左右)，按合适比例进行细胞传代，在盖上标记好细胞名称、代数及传代日期并放入孵箱。（一个1ml枪

3、头）11、将所有试管收至冰箱，将废液缸及废液取出，装至一次性PE手套，废液缸喷酒精清洗12、用酒精棉仔细擦拭操净台表面，检查显微镜、离心机是否关闭，孵箱是否正常；13、做试验记录，打开超净台和细胞间紫外，15min后关闭