罗丹明123染色检测线粒体膜电位.doc

《罗丹明123染色检测线粒体膜电位.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、罗丹明123染色检测线粒体膜电位  化学名：Rh123罗丹明123    别名：　Rhodamine123;Rh123  分子式：C21H17CLN2O3  分子量：380.82     配制：罗丹明123粉剂用甲醇配成1mg/mlde储备液，染色时用DPBS缓冲液将其稀释为所需浓度  保存：冰箱-20度避光一、检测原理：罗丹明123（Rhodamine123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，是一种线粒体跨膜电位的指示剂。其在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质,荧光强度减弱或消失。而在凋亡发生时，线粒体膜完整

2、性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm)的崩溃,Rh123重新释放出线粒体,从而发出强黄绿色荧光，可用荧光显微镜、荧光光度计或流式细胞仪检测，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。二、使用方法：1．细胞染色及分析    （1）培养细胞1×106/mL重悬于培养基中；    （2）加入罗丹明123染液0.1μg/mL～50μg/mL（根椐细胞种类不同而浓度不同，一般3～10μg/mL）；    （3）37℃，5%CO2细胞培养箱孵育1

3、～30min（根椐细胞种类不同而不同，一般10min）；    （4）离心以培养基洗细胞两次；2．组织提取的线粒体染色及分析    （1）按常规方法提取的线粒体，用适量的1×AssaysBuffer（将5×AssaysBuffer用水稀释5倍）重悬；    （2）常规方法进行蛋白含量测定后，用1×AssaysBuffer调配成3mg/mL的线粒体溶液；    （3）取2mL1×AssaysBuffer和1mL线粒体溶液；    （4）加入适量待测化合物（同时设空白对照组），250C保温min；    （5）加入罗丹明123染

4、液10μL；    （6）荧光光度计检测：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下测定，激发波长488～505nm，发射波长530nm，连续记录从0min～30min内荧光强度的变化。三、注意事项1、操作时需戴手套2、罗丹明123为通透性染料，可以自由进入细胞3、孵育时，必须避免光照4、使用时，避免污染母液5、染色完成后，即刻进行荧光检测分析