二氢生物蝶呤还原酶基因启动子核心调控区域的定位及研究.pdf

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1、·490·中国中西医结合肾病杂志2015年6月第16卷第6期CJITWN，June2015。Vo1．16．No．6二氢生物蝶呤还原酶基因启动子核心调控区域的定位及研究术刘蓉蓉’文玉敏①赵海玲①张浩军①孙斯凡①李平①(摘要]目的：前期结果表明QDPR参与糖尿病肾病的发生发展。本研究对QDPR基因启动子核心调控区域定位。分析其转录调控功能。方法：构建合有大鼠QDPR基因翻译起始位点上游2092bp序列的萤火虫萤光素酶报告基因重组质粒。生物信息学预测潜在的核心启动子区域，并构建该区域多个片段缺失的萤火虫萤光素酶报告基因重组质粒。分别瞬时转染HEK293T细胞，通过双萤光素酶报告基因活性分析，定位Q

2、DPR基因启动子的核心调控序列。结果：与一2092一一1序列相比，缺失QDPR基因上游⋯529116序列的萤光素酶活性只有原来的1％(P

3、性调控区和负性调控区。[关键词]糖尿病肾病二氮生物蝶呤还原酶基因核心启动子双萤光素酶报告基因分析IdentificationofCoreRegulatoryRegioninQDPRGenePromoterL／URongrong，WENYumin，ZHAOHailing，etal1)InstituteofClinicalMedicalSciences，China—JapanFriendshipHospital，Beijing(100029)；2)TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine，Tianjin(300193)ABSTRACTObject

4、ive：QDPRisinvolvedindiabeticnephropathybasedonourpreviousresults．TheCOreregulatoryregionofQDPRgenepromoterWasidentifiedtounde~tandbetteritstranscription．Methods：UpstreamsequencesfromATGto一2092，re-gionalseriestruncatedfragmentsofratQDPRgenewererecombinedwithluciferasereportervectorbasedonthebioinfor

5、matics．TherecombinantplasmidsweretransientlytransfectedintoHEK293Tcellsrespectively．ThetranscriptionalactivityWastestedbydual—luciferasereporterassaysystemtolocatetheCOreregulatoryelement．Results：Ascomparedwith一2092～一1fragment，therelativefluorescenceintensityofthedeletedfragment一529～一116reducedto1％

6、(P<0．O1)，thefragmentwhichcontained一529～一1kept64％(P<0．05)．Therelativefluorescenceintensityofthosedeletedfragments一529～一429，一428～一250and一141一一116wereincreased(P<0．O1)，andtlledeletedfragment一249一一142Wasdecreased(P<0．05)．Conclusion：RatQDPRCOrepromoteractivitymightbelocatedbetween·—529and-·116whereexist

7、ingputativenegativeandpositiveregulatoryele--ments，especiMly，existingseveralSplbindingsites．KEYWORDSDiabeticnephmpathyQDPRCorepromoterDual—luc~erasereportergeneassay本实验室前期的蛋白质组学研究发现，与遗传背延缓DN的病理进展，且QDPR基因的si