人samhd1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析

《人samhd1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、人SAMHD1基因核心启动子区域的初步鉴定和分析Lir.张栋李苗苗董阳刘星赞应松成方圣云沈玉先安徽医科大学免疫学教研室安徽医科大学生物药物研究所摘要：目的鉴定人不育-«-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1(SAMHD1)基因的核心启动子区域，研究SAMHD1的转录调控机制。方法从HepG2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399bp片段。将扩増出的4个片段连入pMD19-T载体，双酶切鉴定后将DMA条带切胶回收，再连入pGL3-Basic载体中，双酶切及DNA测

2、序鉴定。将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染HepG2细胞，荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性。5'RACE鉴定SAMHD1在HepG2细胞中的转录起始位点。结果电泳结果显示已经从HepG细胞中提取出基因组DNAoPCR扩増后电泳结果显示已经扩増出937、667、553、399bp片段。双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体。双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体PGL3-937、pGL3-667、pGL3-553和pGL3-399o荧光素酶报告基因活性检测显示SAM

3、HD1核心启动子区域位于0399区域(ATG前一个碱基为-1)o5'RACE结果显示SAMHD1在HepG2细胞中转录起始位点位于T01。结论SAM1ID1的核心启动子位于翻译起始位点上游-10T399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础。关键词：SAMHD1;核心启动了;转录起始位点;转录调控;作者简介：张栋，男，硕士研究生；作者简介：应松成，男，副教授，硕士生导师，责任作者;E-mail:yingsc@ahmu.edu.cn;作者简介：方圣云，男，教授，博士生导师，责任作者，E-mail:sfang@unmry

4、land.edu收稿日期：2017-05-19基金：国家自然科学基金(编号：81372576)IdentificationandanalysisofthecorepromoterregionofhumanSAMHD1geneZhangDongLiMiaomiaoDongYangDeptofImmunology,AnhuiMedicalUniversity;Abstract：ObjectiveToidentifythecorepromoterregionofhumanantiviralSAMHD1gene.MethodsGenomicDN

5、AwasextractedfromHepG2cells,then937,667,553and399bpfragmentsbeforethetranslationstartsiteofSAMIID1genewereamplifiedbyPCRfromgenomicDNA.FourfragmentswereinsertedintothepMD19-Tvector.Afterenzymedigestionandelectrophoresis,DNAbandswereseparatedandligatedintopGL3-Basicvector

6、.ThepGL3plasmidscontainingfourfragmentswerefurtheridentifiedbydoubleenzymedigestionandDNAsequcncing.Theluciferaseexpressionvcctorcontwiningfourfragmentswasco-transfectedwithpRL-TKintoHepG2cellsandthepromoteractivitiesoffourfragmentswereanalyzedbyluciferaseassay.Thetrains

7、criptioninitiationsiteofSAMHD1inHepG2cellswasidentifiedby5’RACE.ResuItsElectrophoreticresuItsshowedthatgenomicDNAhadbeensuccessfullycxtractedfromHepGcells.TheresultsofelectrophoresisafterPCRamplificationshowedthat937,667,553and399bpfragmentshadbeenamplified.Theresultsofe

8、lectrophoresisshowedthatfourfragmentsweresuccessfullyinsertedintopMD19-Tvector.Doubleenzymedigestionand