stgc3基因启动子的初步分析及鉴定

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1、分类号密级UDC编号硕士学位论文STGC3基因启动子的初步分析及鉴定研究生姓名：王莉莉指导教师姓名、职称：贺修胜教授学科、专业名称：病理学与病理生理学研究方向：恶性肿瘤易感分子机制研究2012年5月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名：年月日南华大学学

2、位论文版权使用授权书本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名：导师签名：年月日年月日万方数据本课题资助项目国家自然科学基金课题基金项目（课题编号：No.30470967）教育部博士学科点专项基金资助项目（课题编号：No.20104324110002）湖南省自然科学基金项目（课题编号：No.09JJ3071）湖南省教育厅资助科研项目（

3、课题编号：No.08A060）万方数据目录中文摘要……………………………………………………………1英文摘要……………………………………………………………3前言…………………………………………………………………5技术路线………………………………………………………………7第一部分STGC3基因启动子的生物信息学分析一、材料与方法…………………………………………………9二、实验结果……………………………………………………12第二部分STGC3基因启动子区的克隆及活性分析一、材料与方法…………………………………………………18二、实验结果……………………………………………………27讨论……………

4、………………………………………………33结论………………………………………………………………37参考文献……………………………………………………………38综述………………………………………………………………44攻读学位期间发表论文……………………………………………56附录一……………………………………………………………57附录二……………………………………………………………58致谢………………………………………………………………59万方数据STGC3基因启动子的初步分析及鉴定研究生：王莉莉导师：贺修胜教授中文摘要目的：利用生物信息学及报告基因载体分析方法对STGC3基因启动子区进行预测及

5、活性检测，初步鉴定STGC3基因的启动子区域，为阐明STGC3基因的表达调控机制提供重要的依据。方法：根据STGC3基因的前期研究结果，利用多种生物信息学软件对STGC3基因5’端上游调控区－3046bp至－46bp区域的3000bp序列进行启动子预测，把预测和分析得到的STGC3基因可能的启动子片段构建至萤火虫荧光素酶报告基因pGL3-enhance载体上，然后将重组体转染到人胚肾上皮细胞系293T、人鼻咽癌细胞系CNE2及永生化人鼻咽上皮细胞系NP69，并利用双荧光素酶检测试剂盒检测重组质粒的活性以初步鉴定STGC3基因的启动子区域。结果：生物信息学分析结果显示－3046bp至－46

6、bp区域的转录起始位点有两个，一个在－2348bp处，另一个在－948bp处，而且此区域存在两个CpG岛，CpG岛1位于－1805bp至－1705bp处，长度为101bp;CpG岛2位于－900bp至－684bp处，长度为217bp。该区域未检测到经典的TATA盒序列，－1140bp和－774bp处有GC盒信号，－441bp处有CAAT盒信号。STGC3基因启动子区分值0.8以上的区域位于－2992bp至－69bp，且－845bp至－795bp区域启动子分值最高达到1.0。实验结果显示pGL3-en283、pGL3-en281、pGL3-en571质粒在NP69、293T和CNE2三种细

7、胞中相对于阴性对照pGL3-enhance质粒均有较强的启动子活性，其中pGL3-en281质粒在三种细胞中的启动子活性最强，故－934bp至－653bp区域有可能是其核心启动子区，而且可能在－653bp至＋72bp的DNA序列中含有负性调控元件，而三种质粒在293T细胞中比其在CNE2细胞中的启动子活性强，可能在CNE2细胞中存在影响启动子活性的因素。1万方数据结论：（1）STGC3基因启动子区位于－2992bp至－69bp区域，