《高效价兔抗羊免疫血清制备及其在实验教学中的应用》.pdf

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1、山西医药杂志2015年6月第44卷第11期ShanxiMedJ，June2015，Vo1．44，No．11·基础研究·高效价兔抗羊免疫血清制备及其在实验教学中的应用张淑莉李妮邵明明李小峰家兔经绵羊红细胞(SRBC)免疫后血清中可取健康雄性家兔1O只，通过背部皮内注射和出现抗SRBC的抗体，采集免疫动物血液分离血耳缘静脉注射，依次分别注射羊全血和2SRBC清，即可获得抗SRBC的抗血清。用SRBC与相悬液，共免疫7次，SRBC的具体免疫程序见表1。应抗血清混合，当有补体存在时，在一定条件下，表1兔抗SRBC抗体制备免疫程序SRBC被溶解

2、破坏，故抗SRBC抗体又称为溶血素。动物免疫血清是医学教学、科研及临床实验工作中经常要用到的试剂。但目前市场上购买到的溶血素价格昂贵，效价也不高，因此为了节约经费，使用方便，提高实验课的教学质量，本实验室选取SRBC作为颗粒性抗原，在短时间内获得了高效价的免疫血清(溶血素)，并取得了较好效果，现报告如下。1材料和方法1．4试血1．1主要试剂和器材在末次注射后第5天试血，用无菌注射器在家1．1．1实验动物：健康雄性[1家兔10只，由第四兔耳缘静脉采血1mL，分离析出血清，用试管直接军医大学实验动物中心提供，体质量2～3kg，年龄凝集反应

3、测定SRBC抗血清效价。效价合格即可8个月，毛色光泽，活动好，无任何传染性疾病，无大量采血，如效价不高，可再加强免疫1～2次，可免疫接种史，实验前对家兔进行分笼、编号、称质使抗体效价明显提高。量、标记免疫原等，。1．5采集免疫血清1．1．2主要试剂与器材：3戊巴比妥钠溶液，pH在末次注射后第7天，用动脉插管进行颈动7．4巴比妥缓冲液，豚鼠血清，75％乙醇，冰箱，离脉采血[6]，将血液置于干燥无菌的三角瓶内，做心机，恒温水浴箱，大剪刀，止血钳，动脉导管，玻璃好标记，37℃自然凝固，出现血凝块后再3000试管，眼科手术剪，灭菌三角烧瓶，吸

4、管，兔解剖台r／min离心20min，将上清液转移到F导管中，获等。得抗血清(即溶血素)，测定抗血清的效价后，封好1．2SRBC抗原的制备瓶口，贴好标签，注明抗血清名称、效价及日期，分静脉采集无菌绵羊血，加入肝素抗凝，将羊血用装后置一2O℃冰箱冻存保存备用。也可加入2～3倍体积的0．9氯化钠注射液稀释，反复洗涤30．01的叠氮钠(NaN。)防腐。次，每次2000r／min，离心10min，弃上清后，最后取1．6检测兔免疫血清效价压积红细胞，用巴比妥缓冲液配成2×10。／mL(2)1．6．1溶血素滴定测定SRBC抗血清效价：在试SRBC

5、悬液，置4℃的冰箱备用]。管直接凝集试验阳性的基础上通过溶血素滴定检1．3免疫动物的途径和程序[3]测免疫血清的效价。具体操作方法：取lO支试管依次编号，按表2加入各物质。(豚鼠血清作1：40基金项目：西安医学院校级科研基金大学生科研项目(11DXS11)；西安医学院质量工程检验实验示范中心科研稀释)。项目(XYZL2010—18)将各管混匀后，放37℃水浴30min，以出现全作者单位：710021西安医学院医学技术系检验中心部溶血的血清最高稀释倍数作为该溶血素的效价。山西医药杂志2015年6月第44卷第11期ShanxiMedJ，J

6、une2015，Vo1．44，No．11始表2溶。血素效价滴定的程序及时使用，否则补体活性会降低。}}i(溶血素：：：：试；剂：加入：量：(m：I／管)1．6．350溶血素标准管的制备：取2×10。／mL68l234568t稀释度0溶0血素豚鼠血清缓冲廿液nSRBC液OOOOOOOOO(2％)SRBC悬液0．5mL，加蒸馏水2．0mL，混匀OOOO0O0)000OOOO使SRBC全溶解；再加入2．0mL高渗盐水校正为OOOO0OOOO；；111等渗溶液，最后加入2SRBC悬液0．5mI，即成为5O溶血状态的细胞悬液。取此悬液2．5mI

7、，随试验管一起温育，即为50溶血标准管。1．6．4血清总补体溶血活性(CH。)测定：临床上通过CH。，检测待检者补体活性。取新鲜受检血清0．15mL，加pH7．4巴比妥缓冲液2．85mI，使血清成1：20稀释，取10支试管依次编号，然后按1．6．2制备补体溶液：取豚鼠3～4只，心脏采表3所示加入各物质。血，分离出血清后混匀备用，I临用前用0．9氯化钠注射液作1：(40～60)稀释。最好是当日采血，表3CHs。操作程序及测定结果编号1：2O稀释血清巴比妥缓冲液2u／mL溶血素sRBc悬液目测CHso相对应总补体活性值(mL)(mI)(1

8、'nL)(mL)结果(U／mI)10．101．400．50．5不溶20．151．350．50．5不溶30．2O1．300．50．5不溶40．251．250．50．5微溶50．301．200．50．5半溶60．351．15