低氧诱导因子-1α在喹啉酸诱导的PC12细胞损伤中的作用.pdf

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1、中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2015Apr；31(4)：493～9·493·网络出版时间：2015—3—1615：41网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20150316．1541．019．html低氧诱导因子-1在喹啉酸诱导的PC12细胞损伤中的作用李永金，杨开勇，张谊，陈月芳，端礼荣，黄晓佳(江苏大学医学院1．药理学系、2．基础医学与预防医学实验中心，江苏镇江212013)doi：1O．3969／j．issn．100

2、1—1978．2015．04．011的死亡过程，其中低氧诱导因子一1(hypoxia—inducible文献标志码：A文章编号：1001—1978(2015)04—0493—07factor一1，HIF．1)受到了广泛的关注。HIF一1广泛存中国图书分类号：R一332；R329．25；R338．1；R977．6在于哺乳动物细胞内，是目前发现的一种能感受细摘要：目的探讨低氧诱导因子一1(hypoxiainduciblefactor—胞氧分压的调控蛋白。HIF一1由氧敏感的HIF-1o【lot，HIF—lot)在喹啉酸诱导大鼠肾上

3、腺嗜铬细胞瘤PC12细和组成性表达的HIF一1B两个亚基组成，其中HIF-胞损伤中的作用。方法用不同浓度的喹啉酸(2．5，5和101仅是主要的活性亚基。在常氧下，细胞HIF-1otmmol·L)处理PC12细胞24h诱导细胞损伤，采用噻唑蓝还原法和乳酸脱氢酶漏出率检测法测定细胞损伤程度，采用通过泛素一蛋白酶系统被迅速降解，在胞质中几乎检丙二醛和超氧化物歧化酶试剂盒检测细胞内氧自由基水平，测不到；在低氧下，HIF．1ot变得稳定，继而通过其核Hoeehst33258单荧光染色法观察细胞凋亡，免疫荧光染色定位信号转移至细胞核，与H

4、IF．1B结合形成异二聚法检测HIF—lot在细胞内的表达，免疫印迹法检测细胞HIF一体HIF．1_2-3]。HIF．1通过作用于靶基因上的低氧1、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(phosphorylated—Akt，P—反应元件调控基因的表达，参与血管形成、糖代谢、Akt)、淋巴瘤／白血病_2(Bcelllymphoma／lewkmia一2，Bcl-2)细胞存活和增殖等过程J。在缺血性或出血性脑和Bcl一2相关X蛋白(Bcl-2associatedXprotein，Bax)的表损伤后，大鼠脑组织HIF．1ot表达明显提高

5、；而达。结果喹啉酸可剂量依赖性地诱导PC12细胞损伤，导离体培养的细胞经缺氧缺糖处理后，HIF一1ot表达也致细胞内氧自由基增多和细胞凋亡。同时，喹啉酸可使PC12细胞HIF—lot表达上调并聚集于核内；p-Akt表达增加，明显提高，且出现细胞核内聚集J，表明HIF一1调节Bax／Bcl-2表达比例增加。结论HIF一10【和Akt介导了喹啉了神经细胞的损伤过程。但HIF—lot是否调节神经酸诱导PC12的细胞凋亡；此外，氧化应激过程也可能参与了细胞兴奋性损伤，其作用的分子机制目前仍不明确。细胞损伤。本实验选用大鼠肾上腺嗜铬细胞

6、瘤PC12细胞作为实验对象，以不同浓度QA进行损伤，以模拟神关键词：喹啉酸；PC12细胞；细胞损伤；细胞凋亡；HIF—lot；信经细胞兴奋性毒性损伤，探讨HIF．1ot在PC12细胞号通路；氧化应激损伤过程中的作用及其信号通路，为证实HIF一1及其信号通路参与神经元兴奋性损伤提供依据。许多神经系统疾病，如脑缺血、阿尔茨海默病、1材料与方法帕金森病等的发生、发展过程，均与兴奋性神经递1．1材料大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞株质，如谷氨酸，毒性损伤有关。喹啉酸(quinolinic来自于中国科学院上海细胞库；DMEM培养基和胰a

7、cid，QA)是一种内源性谷氨酸受体亚型N．甲基一D一蛋白酶均购自美国Gibco公司；新生牛血清购自杭天冬氨酸(N．methy1．D—aspa~icacidreceptor，NMDA)州四季青生物工程材料有限公司。QA购自美国受体激动剂，可诱导神经细胞损伤；其在大脑中含量Sigma公司；乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase，大量增加是引起神经元损伤的一个重要原因J，因LDH)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)此被广泛用于制作神经细胞损伤模型。及丙二醛(malonicdialdeh

8、yde，MDA)检测试剂盒均在神经元损伤过程中，有多种因子参与了细胞均购自苏州科铭生物公司。噻唑蓝(3一(4，5-dimeth—收稿日期：2014～11—17，修回日期：2015—01—08yl一2一thiazoly1)-2，5-diphenyl-2-H—tetrazoliu