扁担杆正丁醇提取物抗炎作用及机制研究

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1、第36卷第4期辽宁师范大学学报(自然科学版)Vol

2、36No．42013年i2月JournalofLiaoningNormalUniversity(Natura1ScienceEdition)Dec．2O13文章编号：1000—1735(2013)04—0539—04doi：10．11679／lsxblk2O13O4O539扁担杆正丁醇提取物抗炎作用及机制研究杨春光，高松(大连大学医学院，辽宁大连116622)摘要：采用化学方法制备扁担杆正丁醇提取物．采用二甲苯致小鼠耳郭肿胀法及角叉菜胶致小鼠足肿胀法观察抗炎作用，采用酶联免疫吸附法(E

3、LISA)测定血清IL一1B和TNF—a含量，分析抗炎机制．与对照组比较，高浓度扁担杆正丁醇提取物对二甲苯致小鼠耳郭肿胀及角叉菜胶致小鼠足肿胀均具有显著的抑制作用(P<0．05)，并可不同程度降低角叉菜胶致炎小鼠血清：L-：I3和TNF—a的含量(P<0．05)．扁担杆正丁醇提取物具有一定的抗炎作用，其抗炎作用机制可能与降低TNF—a和IL-I~的表达有关．关键词：扁担杆；抗炎；白介素-18；肿瘤坏死因子一a中图分类号：R285．5文献标志码：A椴树科扁担杆属植物扁担杆(GrewiabilobaG．Don)为落叶灌木或小乔木，在中国主要

4、分布于南方地区，在北方地区也有少量分布．部分扁担杆属植物在亚洲一些国家和地区被作为民间草药使用，多具有抗菌消炎作用D-23．扁担杆一般是以根或全株人药，性味甘、苦、温，归肝、脾、胃经[3]．具有健脾益气，固精止带，祛风除湿等功能，可用于4',JL疳积，脾虚久泻，风湿关节痛等]．目前关于扁担杆提取物抗炎作用及其作用机制的研究较少．本文采用动物实验及酶联免疫吸附试验来初步探讨扁担杆正丁醇提取物(N-butanolextractfromGrewiabiloba，NEG)抗炎作用及作用机制．1材料与方法1．1试剂与仪器扁担杆药材采自大连大黑山(

5、由大连大学医学院中药教研室高松鉴定)；正丁醇(苏州亿隆化工有限公司)；角叉菜胶(Sigma公司)；二甲苯(沈阳市试剂五厂)；地塞米松磷酸钠注射液(江苏长青农化股份有限公司，1mL：2rag)；白介素一lla(IL-1~)试剂盒及小鼠肿瘤坏死因子一a测试盒(TNF-a)(t0为北京康为世纪生物科技有限公司)；LABOROTA-4003efficient旋转蒸发仪(德国Heidolph)；电子分析天平BP2l1D(Startorius)；PV一200足趾容积测量仪(成都泰盟科技有限公司)；BIO—RAD680酶标仪(美国BIO—RAD公司)

6、．1．2药材的提取与分离用体积分数为75乙醇将扁担杆干燥枝1kg在室温下浸泡12h后，分批以体积分数为85乙醇水浴回流提取3次，合并提取液减压回收乙醇，浓缩得总浸膏约100g，以适量的水溶解，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，至有机相没有颜色，浓缩干燥得浸膏粉．临用前把浸膏粉用体积分数收稿日期：2013-06—20基金项目：大连大学创新教育基金项目(2011087)作者简介：杨春光(1971一)，男，湖北黄陂人，大连大学讲师，博士．540辽宁师范大学学报(自然科学版)第36卷为1吐温一80溶液溶解，然后用蒸馏水配置成高浓度(质量

7、分数为25)、中浓度(质量分数为12．5％)和低浓度(质量分数为5)药液．1．3扁担杆正丁醇提取物(NEG)对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响选小鼠50只(由大连大学实验动物中心提供)，体重(2O±2)g，雌雄各半，随机分5组，每组1O只，即对照(生理盐水)组、地塞米松组、NEG高浓度给药组、NEG中浓度给药组和NEG低浓度给药组．对照组和NEG给药组分别灌胃给予生理盐水和不同浓度扁担杆正丁醇提取物，给药体积为0．2mL／10g，连续给药3d，每天1次．地塞米松组实验前腹腔注射0．1mL／10g．末次给药30min后于小鼠左侧耳壳前后两面均匀

8、涂二甲苯0．05mL致炎，另一侧耳作对照．致炎30min后将小鼠拉颈处死，沿耳郭基线将小鼠两耳剪下，在小鼠双耳相同部位用打孔器分别各打1个耳片，称重．左右耳片重量差值为肿胀度，计算肿胀抑制率．肿胀抑制率一(对照组平均肿胀度一给药组平均肿胀度)／对照组平均肿胀度×100％．1．4扁担杆正丁醇提取物对角叉菜胶所致小鼠足肿胀的影响分组及给药同1．3，末次给药30min后，足趾容积测定仪测定致炎前每只小鼠右足足趾容积并皮下注射质量分数为1角叉菜胶0．1mL致炎，并于致炎后的0．5、1、2、3h分别测量并记录各鼠右后足容积，以各鼠致炎前、后足爪容

9、积的差值为肿胀度，计算各时间点肿胀率．肿胀率一(致炎后足容积一致炎前足容积)／致炎前足容积×100o,4．致炎后3h，摘眼球取血留存后颈椎脱臼处死小鼠．1．5角叉菜胶致炎小鼠血清IL-I[~。TNF-a含量