HPLC同时测定饮料中的6种食用色素.pdf

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1、2011年第四届国际食品安全高峰论坛论文集HPLC同时测定饮料中的6种食用色素陈再洁杨慧1．中国农业科学院农产品加工研究所，农业部农产品加工与质量控制重点开放实验室，北京100193；2．西北农林科技大学动物医学院，杨凌712100摘要：利用吸附一解吸过程提取饮料中的食用色素，采用Ultimate@XB．C18(4．6"250mm，5urn)色谱柱，以甲醇一20retool乙酸胺溶液作流动相，梯度洗脱，紫外检测波长为254nm，分离食用色素，采用高效液相色谱仪测定。样品溶液的最佳pH值为6。柠檬黄、览菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝l和亮蓝2的检出限分别为O．17。0．23，0．

2、37，0．30,1．27，1．09ug／mL。回收率为89．5％一9r7．3％，测定结果的相对标准偏差为1．02％．2．99％，线性相关系数是0．9985-0．9999。关键词：HPLC测定饮料食用色素食用色素分为天然和合成色素。从矿物、植物、动物中提炼的食用色素属于天然色素。在饮料中添加一定量的食用色素，可增强饮料的外观美感，激发人们的食欲。但如果向饮料中任意过量添加食用色素，会对人体产生危害。国家标准flJ中规定食用色素柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝的最大限量分别为O．10，0．05，0．025，0．10，0．OESg／kg，国家标准【2】中的检测方法为高效液相色

3、谱法。笔者对该方法的梯度洗脱程序进行了优化，缩短了检测时间，测定饮料中的柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝l、亮蓝2，方法操作简便，重现性好，能满足食用色素的定量分析要求，适合饮料厂和检测机构对食用色素的定量检测。l实验部分1．1主要仪器与试荆高效液相色谱仪器：伍车Lc-100型，带紫外检测器，上海伍丰仪器股份有限公司：电子天平(0．00019),上海舜宇恒平：超声波清洗机：昆山超声波仪器厂等柠檬酸溶液：：2009／L。称取209柠檬酸，用蒸馏水溶解并定容至100TIlL混匀；乙醇．氨水．水混合溶液：分别精密量取无水乙醇70mL、氨水20mL和蒸馏水10mL一混匀；甲醇一

4、甲酸(6“)混合溶液：取甲醇60ml，甲酸40ml混匀；稀氨水：20mI／I，。精密量取氨水2mL，加蒸馏水定容至100mL，混匀；甲醇：色谱纯；聚酰胺粉：过75um筛；食用色素混合标准溶液：准确称取柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝l和亮蓝2标准物质(国家标准物质研究中心)各0．250g，置于250mL容量瓶中，用蒸馏水定容，配制成浓度均为1．t)0Hlg／mL的食用色素混合标准储备液。使用时，用蒸馏水稀释至所需浓度的混合标准溶液：实验所用其它试剂均为分析纯；实验用水为蒸馏水。1．2色谱条件色谱柱：Uldmam@XB．C18(4．6"250mm，Sum，月旭材料科技(I

5、-海)有限公司)；流动相：甲醇．20mmol乙酸胺溶液，流速为0．8mL／min；检测波长：254nm；梯度洗脱；迸样量：10uL；根据保留时间定性，峰面积定量。梯度洗脱程序：1．3样品测定称取样品10．og，+于加热板上加热煮沸去掉C02，冷却致室温，加人柠檬酸(碱性样品)或稀氨水(酸性样品)调节样品溶液的pH=6，加热到60。，将lg聚酰胺粉加适量水调成粥状，倒入试样溶液中，搅拌约10min，用G3垂溶漏斗抽滤，先用pH--4的水洗涤5次，再用甲醇．甲酸混合溶液洗涤5次，再用水洗至中性，最后用乙醇一氨水一水混合溶液解吸5次，每次5ml，收集解吸液，水浴挥至近干，用蒸馏水

6、定容至5mL。经孔径为0．45unl的针筒式滤膜过滤后，进样测定。2011年第四届国际食品安全高峰论坛论文集612结果与讨论2．1色谱图图为食用色素的标准色谱图。O''口俦霜簟∞簪柏2．2流动相分别以甲醇．o．02mol／L乙酸胺溶液、乙睛．o．02mol／L乙酸胺溶液作流动相，采用相同梯度洗脱程序进行比较，色谱峰的分离度、峰型差别不大，但亮蓝在甲醇作流动相时的响应值比乙睛作流动相时大，同时考虑到乙睛的毒性较大，且价格较贵，选择甲醇m02mol／L乙酸胺溶液作为流动相。2．3梯度洗脱程序设定流动相中甲醇的体积分数以不同的比例增加，食用色素的出峰顺序为柠檬黄、苋菜红、胭脂红、

7、日落黄、亮蓝，分离效果较好。2．4样品溶液的pH值用柠檬酸或稀氨水调节样品溶液的pU值，结果表明，当溶液呈酸性时，样品组分的响应值随pH值的增大而略有增加，当pH>6时，样品组分的响应值基本不变。pH值过高时，溶液会腐蚀色谱柱及检测器，故选择样品溶液的pH=6，样品组分既有较大的响应值，又不腐蚀检测器。2．5工作曲线和检出限配制浓度均为10,30,50,70，100ug／mL的食用色素混合标准溶液进行分析，同一浓度样品平行分析6次，取其平均值。结果表明，线性范围均为lO—100ug／mL，线性回归方程及相关系数见表