SSR标记在苹果种质资源及遗传育种研究中的应用.pdf

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1、2009年第5期SSR标记在苹果种质资源及遗传育种研究中的应用王娟，宋尚伟(河南农业大学园艺学院，河南郑州450002)摘要：SSR标记作为一种有效的分子标记手段，被广泛地应用于苹果种质资源和遗传育种研究中。对其在苹果种质资源保存、品种鉴定、遗传多样性、遗传连锁图谱构建、基因标记及定位等方面的应用做了简要概述。关键词：苹果；简单序列重复；种质资源；遗传多样性；遗传连锁图谱中图分类号：$661．1文献标识码：A文章编号：1004—3268(2009)05—0016—05SSR(simplesequencerepeat)即简单序列重1种质资源保存复，通

2、常又称为微卫星(microsatellite)，指以少数几个核苷酸(多数为2～4个，也有报道为1～6个口])种质资源的收集和保存是遗传育种工作的基为单位多次串联重复的DNA序列『2]，长度一般在础。但是，随着种质资源的不断收集，种质资源库变2OObp以下。研究表明，微卫星在真核生物基因组得越来越大，这给保存、评价、研究和利用种质资源中的含量非常丰富，而且常常是随机分布于核DNA带来了众多困难。为此，Frankel提出构建核心中，不仅可以存在于内含子中，也可以存在于编码区种质的设想，即用科学方法从整个种质资源中选择和染色体的其他任一区域。微卫星中重复

3、单位的数一部分样本，以最小的遗传资源数量，最大限度地代表整个遗传资源的多样性。核心种质的提出可解决目存在高度变异，这些变异表现为微卫星数目的整丰富的遗传资源材料的保存、评价、鉴定及利用带来倍性变异或重复单位序列中的序列有可能不完全相的困难，并有利于管理、收集、种质创新及资源的深同，因而造成多个位点的多态性[3．4]。在真核生物层次研究。Mcferson认为，分子标记可以用于核中，大约每隔10～50kb就存在1个微卫星，微卫星心种质的确定，以便以最少量的种质资源最大限度序列两侧均为保守的DNA序列，因此可以利用和地代表资源的遗传多样性。Hokanso

4、nI1用SSR两侧区段互补的短序列引物通过PCR扩增重复序结合农艺性状建立了苹果的核心种质，并利用8个列本身，然后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(或琼脂糖凝SSR引物检测了66个苹果品种(系)，以确定遗传胶电泳)显示DNA重复序列的多态性。同一性、估算遗传稳定性，结果在66个品种(系)中微卫星起初只是作为探针，用于真核生物基因都发现了高水平变异，遗传同一性数据产生了一个组的RFLP(restrictionfragmentlengthpolymor—遗传相关性物候图，并被地理起源以及所了解的家phism)研究。随着PCR(polymerasechainrea

5、e—系信息所证实。tion)技术的建立，SSR迅速应用于人类遗传]和许2品种鉴定多动植物研究中[6～-。SSR标记以其数量丰富、多态性高、重复性好、分布于整个基因组、特异位点扩苹果栽培历史悠久，种间杂交、无性繁殖容易，增、发生频率高、共显性遗传等特性，已应用于果树导致个体差异不明显，同名异种或同种异名现象普的品种鉴别、种质资源管理、遗传图谱和系谱构建以遍。用传统的形态和同工酶鉴定品种，误差大、效率及品种保护等方面的研究口]，在苹果研究中的应低，难以鉴定性状相似的品种，分类标准也难以统用尤为广泛一。为此，对SSR标记在苹果研究一。SSR标记对品种的鉴

6、定实质上是对基因型的中的应用作一综述。鉴定，使果树品种鉴定和分类直接从DNA分子水收稿日期：2009一o3一Ol作者简介：王娟(1984一)，女，河南新县人，在读硕士研究生，研究方向：果树生物技术。通讯作者：宋尚伟(1965一)，男．河南滑县人，副教授，主要从事果树生理及生物技术研究。E—mail：songshw959@163．corn·16·河南农业科学平上进行，准确度高，效率高且信息量大，易于鉴别增出163个位点，其中多态性位点74个，每对引物同一物种的不同基因型，已成为一种有效的品种鉴的多态位点百分率为33．33％～63．16；将供试苹定方法

7、。果品种分为四大类群，与传统系谱分类基本一致，并Gianfranceschi等L1叩用阳性克隆筛选出16个初步建立了一个供试苹果品种的SSR基因型图谱新的苹果SSR引物，通过在Florida、Iduna等21个库，为建立中国苹果品种的SSR基因型数据库奠定苹果品种上测试，16个引物中11个表现出了极好了基础。高源等[3用SSR标记对59份苹果属材料的重复性，并且利用其中的2个引物就能区分21个进行多态性分析，只用筛选出的其中3对引物即可品种。Guilford等利用(GA)和(GT)5作为探区分全部供试材料，通过聚类分析将59份苹果属材针筛选苹果基因

8、组文库，证明了这些重复序列的多料分为三大类群，即栽培品种、地方品种和新疆的野态性，同时开发了苹果的14个SSR引物，仅用其