黏着斑激酶在肿瘤坏死因子α上调人角膜上皮细胞明胶酶.pdf

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1、黏着斑激酶在肿瘤坏死因子α上调人角膜上皮细胞明胶酶活性中的作用王芳杨燕宁邢怡桥袁静肖璇吴若曦杨万举[摘要]目的探讨黏着斑激酶(FAK)在肿瘤坏死因子α（TNF-α）上调体外培养人角膜上皮细胞明胶酶活性中的作用。方法实验研究。体外培养无眼部疾患人角膜上皮细胞，将传至3～4代的细胞暴露于含1μg/LTNF-α（B组）、10μg/LTNF-α（C组）、100μg/LTNF-α（D组）的培养基中，对照组（A组）用含等量磷酸盐缓冲液(PBS)的培养基处理，明胶酶谱分析各组条件培养基中基质金属蛋白酶2和9(MMP

2、-2、MMP-9)的活性，免疫印迹法分析FAK总蛋白表达及磷酸化FAK的表达；运用RNA干扰技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK的表达并重复以上过程。统计学方法使用单因素方差分析，各组间比较采用TukeyHSD检验。结果明胶酶谱分析：与A相比，B、C、D组MMP-2、MMP-9活性均明显上调，差异有统计学意义（A、B、C、D组MMP-2活性表达分别为：124.06±4.06、146.72±5.51、241.18±5.65、389.95±4.44,F=2960.91，P=0.000；MMP-9活性表达分别

3、为：122.78±5.86、165.70±7.90、479.49±6.22、495.88±5.03,F=4937.46,P=0.000)，各组间比较差异均有统计学意义（MMP-2各组间比较均为P=0.000；MMP-9各组间比较P=0.000）；免疫印迹分析：C、D组中磷酸化FAK较A组增加，差异有统计学意义(C、D组磷酸化FAK分别为：0.52±0.03、0.61±0.06;F=431.03,P=0.000)，100μ.g/LTNF-α组较10μg/LTNF-α组中磷酸化FAK表达增加(P=0.00

4、5)；运用RNA干扰技术特异性抑制人角膜上皮细胞FAK表达后，FAK总蛋白较特异性抑制之前明显下调，B、C、D组MMP-2的活性差异无统计学意义(转染后A、B、C、D组MMP-2分别为：55.13±0.66、55.67±0.43、55.49±0.20、55.91±0.37；F=2.73，P=0.079)。10、100μg/LTNF-α干预组中MMP-9少量增加(转染后A、B、C、D组MMP-9分别为：80.48±0.39,81.26±0.62,84.43±0.47，85.56±0.61；F=105.8

5、0，P=0.000)但增加幅度较转染前明显减小，D组较C组MMP-9活性增强，差异有统计学意义(P=0.019)。仅在100μg/LTNF-α干预组中检测到FAK磷酸化(0.47±0.05)，但表达量较抑制前明显减少(t=5.03，P=0.001)。结论FAK信号在TNF-α上调入角膜上皮细胞明胶酶活性过程中发挥一定作用，针对这一过程干预可能对防治角膜病变有意义。[关键词]黏着斑蛋白酪氨酸激酶类；肿瘤坏死因子α；明胶酶类；上皮，角膜；RNA，小分子干扰Effectsoffocaladhesionalk

6、inasesignalingonTNF-αinducedgelatinasesactivityincorneaepitheliumWANGFangYANGYan-ningXINGYi-qiaoYUANJingXIAOXuanWURuo-xiYANGWan-juResearchInstituteofOphthalmology,EyeCenter,RenminHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430060,China[Abstract]ObjectiveToinvestigat

7、etheeffectoffocaladhesionalkinase(FAK)ontumornecrosisfactorα(TNF-α)-inducedMMP-2and-9activitiesincorneaepithelium.MethodsExperimentalresearch.Thehumancornealepithelialcells(HCE)wereculturedinvitro.HCEswereincubatedwithdifferentconcentrationsofTNF-αfor24

8、h,including1μg/L(groupB),10μg/L(groupC)and100μg/L(groupD).Thecontrolgroup(groupA)wasincubatedwithphosphatebuffersolution.TheactivitiesofMMPswereexaminedbygelatinzymographyandthephosphorylationofFAKwasexaminedhywesternblot10.3760/