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1、第12卷第1期同 位 素Vol.12No.11999年2月JournalofIsotopesFeb.1999甲状腺球蛋白抗原固相放免法的建立及初步临床应用沈江帆 张乃康 高克家(上海市普陀区中心医院,200062)摘要 利用自制的甲状腺球蛋白(Tg)单克隆抗体,建立了Tg固相放射免疫分析方法,其灵敏度为0135LgöL,回收率达98%,批内CV411%,批间CV817%。50例健康人的Tg测定值为11112±4183LgöL,检测范围为2199～20116LgöL;同时对140例各种甲状腺疾病患者的血清Tg含量进行检测,并与Tg双
2、抗法进行对比,结果表明固相法检测范围明显较双抗法宽。125关键词 甲状腺球蛋白(Tg)TgMcAb 固相放免分析 I标记中图法分类号 R44616R581R817Q51212甲状腺球蛋白(Tg)是由甲状腺合成的蛋白质,测定血液中Tg的含量,对甲状腺功能亢进以及分化型甲状腺癌的诊断、治疗效果评价有一定的价值。本院于1986年建立了Tg双抗放[1]免法。随着免疫分析技术的发展和单克隆抗体的产生,有必要建立Tg抗原固相放免法。1 实验方法111Tg抗原的制备Tg抗原制备按文献[1]方法进行。分离、纯化的主要步骤包括:取手术切下的甲状腺机
3、能亢进患者的甲状腺组织,经冷冻、超声粉碎、超速离心、HPLC纯化等步骤,获得Tg抗原,浓度为8göL。Tg相对分子量为6601000,等电点416,沉降系数27s,聚丙烯电泳见一条区带。112Tg单克隆抗体制备经免疫、杂交、克隆、纯化等步骤,获得三株Tg单克隆抗体,抗体定型均为TgG。用双抗体法测定,Tg单抗经1∶32000稀释,0管结合率为58%;用本院自制血凝法Tg抗体法测定,Tg单抗经1∶51200稀释,仍呈阳性。125113I-Tg单克隆抗体制备取三株单克隆抗体混合,每次标记用量为50Lg。采用Iodogen法进行标记,以
4、0101molö7125L的磷酸缓冲液作标记缓冲液,将50LgTg单克隆抗体、317×10BqI及缓冲液(总体积沈江帆:男,48岁,副主任医师,核医学专业收稿日期:1998205226 修改稿收到日期:1998208231 第1期 沈江帆等:甲状腺球蛋白抗原固相放免法的建立15016mL)加入预制的Iodogen涂管中,室温反应7min,吸出反应液以终止反应。SephadexG250柱分离,以0101molöL磷酸缓冲液淋洗,取第一峰测放射性。计算其标记率为80%,放射性12比活度为519×10BqöL。同时,以
5、单株、双株单克隆抗体标记,作对照用。114 固相Tg单克隆抗体包被珠由3V公司协助,采用吸附法制备。三株单抗混合包被。115 标准品制备取纯化Tg,用0101molöL磷酸缓冲液稀释成0、10、50、100、200、500LgöL的标准浓度。116Tg固相放免法操作步骤其操作步骤列于表1。表1Tg固相放免法操作步骤加入成分标准管样品管标准液012mL待测液012mLHTgMcAb包被珠1粒1粒混匀,37℃放置2h;吸取反应液,加2mL蒸馏水,吸去蒸馏水;重复洗涤1次125I2HTgMcAb012mL012mL37℃放置1h;吸去反
6、应液,重复以上洗涤步骤,把包被珠倒入另一塑料试管中,测放射性2 结 果211 标准曲线125I2Tg固相放免法的标准曲线示于图1。2.2 质量控制指标21211灵敏度 以0管平均计数率减去2个标准差计算。本法的灵敏度为0135LgöL。单株灵敏度为0145LgöL,双株灵敏度为0140LgöL。21212 准确度 在高浓度样品中加入不同浓度Tg进行回收试验,其平均回收率为98%。21213 精密度 批内CV为411%,批间CV为817%。21214 健全性 取一个Tg为420LgöL血清标本,以1∶2,1∶4,1∶8,1∶16稀释
7、。稀释度与测得含量之间呈高度相关直线关系(r=-01982)。12521215 稳定性 制得的I2Tg单克隆抗体于-30℃贮藏,一个月内,脱碘率为5%。213 固相法及双抗法比较 分别用固相法及双抗法检测50例健康人和140例各种甲状腺疾病患者Tg含量,结果列于表2。由表2可知,50例健康人TgAb均为阴性,140例各种甲状腺疾病患者中,25例慢性淋巴细胞性图1Tg固相放免分析标准曲线16同 位 素 第12卷 甲状腺炎及15例甲状腺功能亢进者TgAb呈阳性,其余患者TgAb均呈阴性。-1表2 两种
8、方法测定结果Lg·L固 相 法双 抗 体 法组 别例数qqx±s范围x±s范围健康对照组5011.12±4.832.99～20.167.85±3.950.92～15.00慢性淋巴细胞性甲状腺炎3010.52±5.212.01～25.623.75±
