VEGF165真核表达载体的构建及其对白血病细胞增殖和化疗.pdf

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1、中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2QQ()；二·533·[文章编号】1000-4718(2010)03—0533—06VEGFl真核表达载体的构建及其对白血病细胞增殖和化疗药物敏感性的影响球荆春霞，张洹，杨光(暨南大学医学院流行病学教研室，血液病研究所，。人体寄生虫学系，广东广州510632)[摘要】目的：构建血管内皮细胞生长因子的真核表达载体，探讨其对白血病细胞的增殖以及化疗药物敏感性的影响。方法：应用常规基因克隆方法构建pEGFP—C1一hVEGF。真核表达载体

2、，转染白血病细胞K562，采用CCK8法检测重组质粒对细胞增殖的影响，RT—PCR方法检测细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA的表达水平，ELISA方法定量检测细胞培养液和细胞内VEGF蛋白的表达水平，用流式细胞仪检测细胞周期。结果：经酶切鉴定和基因测序证实成功构建了VEGF。真核表达载体。稳定转染pEGFP—C1一hVEGF。65的K562细胞较转染pEGFP—CI空质粒的K562细胞增殖加快，VEGFmRNA表达明显增加，细胞分泌VEGF蛋白水平上调。转染pEGFP—C1一hVEGF还可以提高白血病

3、细胞在化疗药物高三尖杉酯碱和氟尿嘧啶作用时的细胞存活率。结论：VEGF，真核表达载体可以上调白血病细胞K562的VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达水平，从而促进白血病细胞的增殖，同时可以降低白血病细胞对化疗药物高三尖杉酯碱和氟尿嘧啶的敏感性。[关键词]血管内皮细胞生长因子；真核表达载体；K562细胞；高三尖杉酯；氟尿嘧啶[中图分类号]R733．7[文献标识码]AConstructionofVEGFeukaryoticexpressionvectoranditsefectsonpro-liferationand

4、chemosensitivityinleukemiacellsJINGChun—xia，ZHANGHuan，YANGGuang(DepartmentofEpidemiology，InstituteofHematology，DepartmentofParasitology，MedicalCollegeofJinanUniversity，Guangzhou510632，China．E—mail：咖hx@．edu．en)[ABSTRACT]AIM：Toconstructeukaryoticexpressionvect

5、orofhumanvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)gene，andtoexploretheefectsofVEGFgeneonproliferationandchemosensitivityofleukemiacells．METH-ODS：TherecombinantcukaryoticexpressplasmidpEGFP—C1一hVEGF1wasconstructedwithconventionalgeneengi—neeringmethods．ThepEGFP—C

6、1一hVEGFl65wastransfectedintoleukemiacellK562．Theproliferationoftherecombi—nanteukaryoticexpressionplasmidwasanalyzedbyCCK8method．ThelevelofVEGFmRNAwasdetectedbyreversetran—scriptionandquantitativepolymerasechainreaction(RT—PCR)．TheexpressionlevelofVEGFprotei

7、nwasdeterminedbyELISAincellculturemediumandcells．Thecellcyclewasdetectedbyflowcytometry．RESULTS：VEGFl65eukaryoticexpressionvectorwassuccessfullyconstructed，confirmedbyenzymedigestionandsequencing．ComparedwiththeK562cellstransfectedpEGFP—C1，theI(562cellstrans

8、fectedwithpEGFP—C1一hVEGFl65grewfasterandexpressionsofVEGFmRNAandproteinincreasedsignificantly．Inaddition，K562cellstransfectedwithpEGFP—C1一hVEGF165hadrelativelyhighercellsurvivalratetochemotherap