资源描述：
《传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第20卷第5期中 国 兽 医 学 报Vol.20,No.52000年9月ChineseJournalofVeterinaryScienceSept.2000传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971毒株)结构蛋白和S1基因的结构分析周继勇 (浙江大学动物预防医学研究所,浙江杭州310029)摘要:对来自浙江地区的传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株(ZJ971株)的结构蛋白进行了SDS电泳分析,用RT2PCR扩增其S1基因cDNA,并作了测序分析。结果显示,ZJ971株结构蛋白由212000、146000、97400等8条蛋白带组成,与其他传染性支气管炎病毒株相比缺损116000蛋白条带;
2、S1基因全长为1720nt,编码1条551个氨基酸组成的多肽,其核苷酸与其他传染性支气管炎病毒株的同源性为99.40%～77.85%。ZJ971株不同于其他血清型传染性支气管炎病毒的最显著特征为:S1基因125、182、277位上的碱基被置换,缺失FokÉ、BbVÉ、PflmÉ、Fnu4HÉ4个核酸内切酶位点;S1蛋白多肽链41、59、91、141位点上的氨基酸被置换,并在二级结构上出现40～50位氨基酸区域的亲水性下降、140～150位氨基酸之间的亲水性上升和最大亲水峰区域改变。关键词:鸡;传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株;结构蛋白;S1基因中图分类号:S852165文献标识码:A文章编号:
3、100524545(2000)05204292051996年初,在江苏发现了以腺胃肿大为特征TEN溶解,并再以30000römin蔗糖密度梯度离[1]的鸡传染性腺胃病。1997年初,我们在浙江也心3h,收集病毒条带(测定其蛋白浓度),加入以发现了类似病例,并分离鉴定了病毒,暂定名为传DEPC水配制的20göL蛋白酶K和10%SDS,至[2]染性腺胃炎病毒。通过人工感染试验证实了该终质量浓度为100mgöL蛋白酶K和0.5%SDS,[3]病毒的致病性。本试验进一步分析了该病毒的置于53℃水浴2.5h,用饱和酚、酚ö氯仿(1∶1)、结构蛋白和基因结构以及与传染性支气管炎病毒氯仿ö异戊醇(24∶
4、1)各抽提1次,上清液中加入(IBV)的亲缘关系。1ö10体积的3molöLNaAc(pH5.2)和2.5倍体积冰冷的无水乙醇,于-20℃过夜,以12000rö1 材料与方法min于4℃离心15min,弃上清,加入2倍体积70%乙醇,4℃离心,12000römin5min,用1.1 病毒株及繁殖 ZJ971毒株,本实验室分离DEPC水悬浮沉淀,-70℃保存备用。[2]保存。IBV2H120、IBV2T毒株,为本实验室保存1.3 酶与试剂 BamHÉ、HindË、TaqPlusÉ的标准毒株。上述病毒株经尿囊腔分别接种于10DNA聚合酶、鼠源Molony反转录酶(MLV2日龄SPF鸡胚,37℃
5、孵化36h,剔除24h内死亡RTase)、T4DNA连接酶、FirstStrandDNA鸡胚后,4℃冷藏24h,无菌采集鸡胚尿囊液,SynthesisKit,为MBI公司产品;PCR产物纯化-40℃保存备用。Kit,为QIAquick公司产品;RNasin、dNTP、蛋白1.2 病毒纯化及基因组RNA提取 取上述病酶K、质粒pBluescriptSK等,均购自上海Sangon毒尿囊液,用PEG沉淀病毒。取沉淀,用少量生物工程公司;E.coliDH5A,由本所保存;HRP标TEN缓冲液溶解,30000römin离心3h,沉淀用记兔抗鸡IgG、碱性磷酸酶标记兔抗鼠IgG、蛋白质Marker,为
6、Promega公司产品;抗IBV2H95株N 收稿日期:1999212228蛋白McAb,扬州大学朱国强博士惠赠。 基金项目:国家自然科学基金资助项目(39970030);浙江省1.4PCR引物设计 扩增S1糖蛋白基因的引自然科学基金资助项目(399411);浙江省重点科技项目(991102030)物,参照国外发表的IBV2Beaudette株基因组序[4] 作者简介:周继勇(1963～),男,副教授,博士。列设计,并作适当改进。上游引物与S1基因5′©1995-2004TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.430中
7、 国 兽 医 学 报2000年末端序列相同,覆盖了S1基因非编码区的前导序列,包含同源序列CTGAACAA,位于起始密码2 结果子前45～65nt,其5′端外加HindË酶切位点;下游引物位于S蛋白裂解位点后S2糖蛋白N末端2.1 病毒蛋白SDS-PAGE及Western-blotting侧,并与S2基因5′末端序列互补,在起始密码子检测 IBV2H120、IBV2T株各有212000、后1634～1654nt
