猪肺炎支原体168株特异性单抗的制备及鉴定.pdf

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1、江西农业学报2012，24(11):125～128ActaAgriculturaeJiangxi猪肺炎支原体168株特异性单抗的制备及鉴定*王海燕，缪芬芳，冯志新，刘茂军，邵国青(江苏省农业科学院兽医研究所、农业部兽用生物制品工程技术重点实验室、国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京210014)摘要:将猪肺炎支原体168株全菌蛋白免疫小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，3次亚克隆后，获得了4株针对168株全菌蛋白的单抗，分别将其命名为2F5、2G7、4F5、5E9。Western－blot检测结果表明，2G7、4F5与猪肺炎支原体具有特异性反应条带，不与猪鼻支原体、大肠杆菌反应

2、。亚型鉴定结果表明，两株特异性单抗(2G7、4F5)的亚型属IgG1，轻链为κ型，2F5、5E9亚型属IgG2a，轻链为κ型。间接免疫荧光结果表明，4株单抗均与猪肺炎支原体168株有特异性荧光反应，特异性单抗的获得为猪肺炎支原体的检测及机理研究奠定基础。关键词:猪肺炎支原体;单克隆抗体;间接免疫荧光中图分类号:S858．28文献标识码:A文章编号:1001－8581(2012)11－0125－04PreparationandIdentificationofMonoclonalAntibodiesagainstMycoplasmahyopneumoniaeStrain168*WANGHai－ya

3、n，MIAOFen－fang，FENGZhi－xin，LIUMao－jun，SHAOGuo－qing(InstituteofVeterinaryMedicine，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences;KeyLaboratoryofVeterinaryBiologicalEngineeringandTechnology，MinistryofAgriculture;NationalCenterforEngineeringResearchofVeterinaryBio－products，Nanjing210014，China)Abstract:Balb/cmice

4、wereimmunizedwithMycoplasmahyopneumoniae(Mhp)strain168，andthesplenocytesoftheimmu-nizedmicewerefusedwithSP2/0cells．Aftersubcloningfor3times，fourhybridomacloneswhichproducedMonoclonalAntibodies(McAbs)steadilywerescreenedbyELISA，named2F5，2G7，4F5，and5E9．TheresultofWestern－blotindicatedthat2G7and4F5both

5、stronglyspecificallyreactedwiththeMhpstrain168．BothoftheMcAbs(2G7and4F5)belongedtoIgG1isotype，andtheirlightchainswereκtype．However，2F5and5E9belongedtoIgG2aisotype，andtheirlightchainswerealsoκtype．TheyallreactedstronglywithMhpstrain168inimmunofluorescenceassay(IFA)．TheMcAbscouldbeusedforthedetectiona

6、ndpathogenicmecha-nismresearchofMhp．Keywords:Mycoplasmahyopneumoniae;Monoclonalantibody;Immunofluorescenceassay猪支原体肺炎(Mycoplasmahyopneumoniae，Mhp)，亦全菌蛋白作为免疫原，获得4株针对猪肺炎支原体168称猪地方流行性肺炎、猪气喘病，是一种接触性、慢性呼株的单抗，其中有2株特异性针对猪肺炎支原体，特异性吸道传染病。该病以咳嗽、喘气、生长发育迟缓及饲料转单抗的获得为猪肺炎支原体的致病机理研究和特异性检化率低为特征，发病率高，死亡率低，但是由于其破坏呼测方法

7、的建立奠定了基础。吸道黏膜纤毛屏障，容易继发其他病原的感染，而引起猪1材料和方法的死亡，严重危害养猪业，给养猪业造成严重的经济1．1主要材料和试剂猪肺炎支原体168株，由本实［1－3］损失。验分离鉴定并保存;胎牛血清购自大治生物科技有限公目前，用于检测感染的诊断试验方法有分离培养、司;弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、聚乙二醇(间接血凝、ELISA、PCR法。但由于猪肺炎支原体分离培PEG4000)购