β-淀粉样肽与乙型肝炎核心抗原融合基因Aβ-HBcAg表达.pdf

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1、1期刘朝晖，胡海涛，马东亮，等.重组人BDNF对Alzheimer病模型神经元作用的实验研究9淀粉样肽与乙型肝炎核心抗原β-融合基因A表达载体的构建β-HBcAg冯改丰1，胡海涛1，刘中华1，王全颖2，杨广笑2（1西安交通大学医学院人体解剖学教研室，西安710061；2西安华广生物工程公司，西安710025）摘要：目的构建β-淀粉样肽（β-amyloidpeptide，Aβ）与乙肝核心抗原（HBcAg）融合基因Aβ-HBcAg的原核表达载体pBV220/Aβ-HBcAg，为阿尔茨海默病基因工程疫苗的研究和制备奠定基础。方法采用非对称

2、互补引物/模板法，制备两端含有酶切位点的Aβ1-42肽的cDNA，将其连接到删除了Pre-C区的HBcAg亚型ayw基因的N端组成融合基因Aβ-HBcAg，再将该融合基因亚克隆于载体pBV220，构建为原核表达载体pBV220/Aβ-HBcAg。结果经DNA测序，限制性内切酶酶切等方法证实已成功地将Aβ1-42cDNA重组到HBVcore的N端，并将融合基因亚克隆于pBV220内。结论成功构建了原核表达载体pBV220/Aβ-HBcAg。关键词：β-淀粉样肽；乙型肝炎核心抗原；融合基因中图分类号：R749.1文献标识码：A文章编号：

3、1671-825（92003）01-0009-05ConstructionofexpressionvectorforAβ-HBcAgfusiongeneFengGaifeng，HuHaitao，LiuZhonghua，WangQuanying，YangGuangxiao（DepartmentofHumanAnatomy，MedicalCollegeofXi’anJiaotongUniversity，Xi’an710061，China）ABSTRACT：ObjectiveToconstructprokaryoticexpression

4、vectorbearingAβ-HBcAgfusiongeneandlayfoundationforthestudyandmanufacturingofgeneticengineeringvaccineofAlzheimer’sdisease.MethodsBymeansofasymmetricalcomplementprimer>template，doublestrandedc?@AofAβ1-42Aasgained.ThefusiongenenamedAβ-HBcAgAasobtainedbyligatingAβ1-42c?@A

5、andayA.onesubtypeofHBcAg，Ahichpre-BdomainAasdeleted.ThenitAassubclonedintoprokaryoticexpressionvectorpBC220.ResuItsDvidencesof?@AseEuenceanalysisandrestrictionenzymesdigestionshoAedthatAerecombinedAβ1-42c?@Atothe@-terminalofayAgene，andthefusiongeneAassubclonedintopBC22

6、0successfully.ConcIusionFrokaryoticexpressionvectorpBC220>Aβ-HBcAgcanbeconstructedsuccessfully.KEYWORDS：β-amyloidpeptide；HBcAg；fusiongene阿尔茨海默病（Alzheimer’sdisease，AD）是以-42肽的免疫原性，本研究采用非对称互补引物/大脑皮质和海马结构内出现大量的老年斑（senile模板法，制备了在3’端加入NdeⅠ酶切位点的Aβ1plaque，SP）和神经原纤维缠结为主要病理特征的-4

7、2的cDNA片段，通过NdeⅠ切点将其连接于中枢神经系统退行性病变。虽然目前其病因不完HBcAg基因的N端组成融合基因Aβ-HBcAg，再将全清楚，但研究表明老年斑的核心成分为含有42该融合基因亚克隆于原核表达载体pBV220，构建个氨基酸残基的淀粉样肽（，A成能表达融合蛋白的原核表达载体pBV220/Aβ-β-amyloidpeptideβ1β--42），其纤维化和聚集是AD发生和发展的关键HBcAg。经DNA测序、限制性内切酶酶切等方法鉴环节。如何预防和清除AD患者脑内的SP一直是定证实已成功地将A融合到删除了β1-42cDNA

8、医学工作者面临的一大难题。近年来研究发现用Pre-C区的HBcAg亚型ayw基因的N端。Aβ1-42肽作疫苗主动免疫或以其抗体被动免疫AD1材料和方法转基因小鼠，不但可清除模型鼠脑内已形成的老年斑，而且还可预防老年斑的形成［1］。这一