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1、·8·中国防痨杂志2000年第22卷第1期应用PCR-RFLP分析结核分枝杆菌rpsL基因突变333吴雪琼 张俊仙 庄玉辉摘要 目的 了解结核分枝杆菌链霉素(SM)耐药基因突变情况,建立快速检测耐药突变株的方法。方法 通过PCR-RFLP分析62株结核分枝杆菌临床分离株的rpsL基因突变的部位和性质。结果 以H37RV标准株为对照,13株敏感株的rpsL基因有MboⅡ酶切位点;37株耐SM分离株中,31株(8318%)无MboⅡ酶切位点;12株耐其它抗结核药物株中,也有2株无MboⅡ酶切位点。结论 大多数结核分枝杆菌SM耐药分离株的核糖体S1
2、2蛋白编码基因(rpsL)第43位密码子有点突变。PCR-RFLP可能成为快速检测结核分枝杆菌耐药突变株的一种新方法。关键词 分枝杆菌,结核 药物耐受性 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性AnalyzingthemutationsofrpsLgeneinMycobacteriumtuberculosisclinicalisolatesbyPCR-RFLPWUXueqiong,ZHANGJunxian,ZHUANGYuhui.TuberculosisResearchLaboratory,The309thHospital,Beijing10009
3、1.AbstractObjectiveToobservethemutationsofrpsLgeneinM.tuberculosisstreptomycin-resistantiso2lates,andtodevelopanewmethodfordetectingdrugresistance.MethodAnalyzingthemutationsofrpsLgenecodon43inM.tuberculosisclinicalisolateswithPCR-RFLP.ResultsM.tuberculosisstrainH37RVwasuse
4、dasacontrol.TherpsLgenefragmentsfrom13drug-sensitivestrainscouldbedigestedbyrestrictionendonucleaseMboⅡ.31(83.8%)of37streptomycinresistantstrainswerenotrestrictedbyMboⅡ.2of12non-streptomycin-resistantstrainshadn’talsositesofMboⅡ.ConclusionsMostM.tuberculosisstreptomycin-res
5、istantstrainscouldbeobservedthemutationssituatedatcodon43ofgenesencodingtheribosomalS12protein(rpsL).PCR-RFLPmightbecomeasimple,rapidandreliablemeansofdetectingdrugresistanceinclinicalisolates.KeywordsM.tuberculosisDrugresistancepolymerasechainreactionRestrictionfragmentlen
6、gthpolymorphism 近年来,随着分子生物学技术的发展和结核分枝于其核糖体蛋白S12编码基因(rpsL)和(或)16SrRNA杆菌基础研究的深入,抗结核药物耐药的分子机制研编码基因(rrs)突变所致。本文应用聚合酶链反应究也取得了一定的进展,应用分子生物学技术检测结(PolymeraseChainReaction,PCR)———限制性片段长度核分枝杆菌耐药基因,很可能成为一种新的结核分枝多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,杆菌耐药性测定方法,它只需2～3天时间,与经典的PFLP)分析
7、结核分枝杆菌临床分离株rpsL基因突变,方法相比大大缩短了时间,从而能够为临床治疗的用研究其临床意义。药选择提供依据,有利于开展更有效的化疗。链霉素(SM)是1945年发明的第一种有效的抗结核氨基环醇糖苷类抗生素,目前仍是结核病治疗的一3 解放军309医院结核病研究室,北京 100091[1,2]线药物。最近的研究认为某些菌株SM耐药是由©1995-2006TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd.Allrightsreserved.中国防痨杂志2000年第22卷第1期·9·表1结核分枝杆菌临床分离株药敏试验和PC
8、R-RFLP结果材料与方法菌 株 编 号药敏试验PCR-RFLP1,2,3,4,5,24,33,34,40,43,45,53,78敏感酶消化11菌株来源和药敏试验:
