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1、·332·ChinJTubercRespirDis,December1997,Vol20,No.6·论 著·耐多药结核病耐药分子机制的研究吴雪琼 庄玉辉 张俊仙 张晓刚 何秀云 李国利摘要 目的 研究耐多药结核分支杆菌耐药的分子机理,建立快速检测耐药基因型的分子药敏试验方法。方法 通过PCR和PCR2SSCP分析结核分支杆菌耐多药临床分离株的rpoB、rpsL、katG基因和inhA调节序列。结果 PCR分析耐药基因的敏感性为1～10pgDNA;除rpoB基因引物PCR扩增为属特异性外,余耐药基因引物PCR扩增都
2、具有较高的特异性。20株耐多药分离株中,90%有2种以上耐药遗传标志改变,10%只有rpoB基因突变。结论 耐多药是各种药物靶基因逐步突变所致,少数由一个耐多药位点突变所致,通过PCR、PCR2SSCP可简便、快速地检测大部分结核分支杆菌耐多药分离株的耐药基因型。关键词 结核,抗多种药物性 聚合酶链反应 多态现象,单链构象 分支杆菌,结核Studyonthemolecularmechanismofmulti-drugresistanceinclinicalisolatesofMycobacteriumtu-b
3、erculosisWuXueqiong,ZhuangYuhui,ZhangJunxian,etal.TuberculosisResearchLaboratory,309thHospital,P.L.A.,Beijing100091AbstractObjectiveTostudythemolecularmechanismofmulti2drugresistanceinM.Tuber2culosis,andtodevelopanewmethodfordetectinggenesrelatedwithmulti2drug
4、resistance.MethodTheropB,rpsL,katGgenesandinhAregulatorysequenceinclinicalisolatesofM.tuberculosiswereanalyzedwithPCRandPCR2SSCPtechniques.ResultThesensitivityofamplifingthedrug2resistantgeneswithPCRwas1～10pgDNA.Ofthe20multipleresistantstrainswithreducedsensi2
5、tivitytostreptomycin,rifampinandisoniazid,90%showedmutationsinmorethantwogeneticmarkersassociatedwithresistancetoeachofthesethreedrugs,10%revealedonlymutationsinrpoBgene.ConclusionMulti2drugresistanceinM.tuberculosiscouldbecausedbyanaccumulationofmutationsinch
6、romosomalgenesencodingdrugtargetsoranalterationatasinglemultipleresistancelocus.PCRandPCR2SSCPtechniquesmightbecomesimple,rapidandreliablediagnostictestsformulti2drugresistance.KeywordsTuberculosis,multidrug2resistantPolymerasechainreactionPolymor2phism,single
7、2strandconformationalMycobacteriumtuberculosis 耐多药结核病(MDR2TB)是指耐异烟肼疫缺陷病毒感染者中死亡率更高(72%～(H)和利福平(R)两种或两种以上抗结核药物89%),已被称为“第三种流行病”(第一种是的结核分支杆菌引起的结核病。[1]1992年美国发AIDS,第二种是结核病)。MDR患者对大多[1]生了多起耐多药结核病的暴发流行,不仅耐数一线抗结核药物耐药,采用目前标准的结核药菌传播快,而且患者病情进展迅速,从诊断到化疗方案治疗无效,而传统的药敏试验需1
8、～2死亡平均4～6周,死亡率高(37%),而在人免月时间,有些患者在药敏结果出来前已死亡。耐药菌不仅在AIDS患者中播散,也传染给医护作者单位:100091北京解放军第三O九医院结核病研人员和其它AIDS接触者。我国的结核病疫情究室和耐药情况也很严重。因此,对MDR耐药机©1995-2006TsinghuaTongfangOpticalDiscCo.,Ltd
