人多发性骨髓瘤细胞株rpmi8226和u266对trail耐药的机制探讨

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1、山东医药2010年第50卷第31期人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266对TRAIL耐药的机制探讨浦践一，魏晓璇，沈扬(华北煤炭医学院附属医院，河北唐山063000)摘要：目的探讨人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266对TRAIL耐药的机制。方法将人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266进行培养、传代，分别加入终质量浓度为0．5、1．0、2．0、5．0、10．0g／ml的TRAIL分别作用12、24和48h后收集细胞。通过倒置显微镜观察TRAIL作用前后RPMI8226及U266细胞形态学变化检测细胞凋亡情况，通过半定量

2、RT-PCR方法检测TRAIL受体mRNA水平。结果随着药物浓度的增加及药物作用时间的延长，RPMI8226细胞凋亡的数量增加，而U266细胞形态并无明显变化。TRAIL受体DR5mRNA在RPMI8226中的表达水平高于U266，而DcR1mRNA在U266中的表达水平高于RPMI8226(P均<0．05)。结论TRAIL可通过DR5受体诱导的凋亡途径诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡，而U266细胞则可通过DcR1受体干扰凋亡信号传导，从而对TRAIL耐药。关键词：肿瘤坏死因子TRAIL；人多发性骨髓瘤细胞株；耐药中图分类号

3、：R733．3文献标志码：B文章编号：1002-266X(2010)31-0063-02TRAIL是肿瘤坏死因子(TNF)家族中的重要一1．2．2细胞形态学观察倒置显微镜下观察不同员，其生物学特点是仅诱导多种组织来源的肿瘤细浓度的TRAIL作用后RPMI8226及U266细胞的形胞、转化细胞或病毒感染细胞凋亡，而对正常组织细态学变化。胞没有影响。目前已发现5种TRAIL受体，分别是1．2．3TRAIL受体mRNA表达检测收集TRAIL死亡受体DR4、DR5，诱捕受体DcR1、DcR2和可溶作用后的RPMI8226细胞及U266细胞，Tfizo

4、l提取性受体Oseoprotegerin(OPG)。DR4和DR5均含有细胞总RNA，电泳鉴定RNA并定量，逆转录合成“死亡结构域”，可通过死亡受体信号传导途径诱导cDNA。采用半定量RT—PCR法。取上述8l产物凋亡的发生；而DcR1和DcR2均缺乏细胞内信号传经2％琼脂糖凝胶电泳50min，在读胶仪(AlphaIm—导系统，不能将凋亡信号向下传递，但均能竞争性与agerl200)上进行扫描，相应位置上显示有条带者，TRAIL结合，干扰凋亡信号的传导。2008年l2月为有目的基因的表达。各基因mRNA的相对表达～2009年12月，我们观察了

5、TRAIL对RPMI8226水平以其各自的灰度值除以相同标本B—actinmR—和U266的形态及其TRAIL受体表达水平的影响，NA的灰度值表示。探讨TRAIL对人多发性骨髓瘤的作用机制及细胞1．3统计学方法采用SPSS10．0统计软件。计对其的耐药机制。量数据以x4-s表示。对资料进行正态性检验和方1材料与方法差齐性检验。采用ANOVA方差分析，方差齐组间1．1材料Triol、逆转录反应体系及总RNA提纯两两比较采用q检验，方差不齐组间两两比较采用t试剂盒(北京赛百盛)；琼脂糖及绿色体系(Pro—检验。P≤O．05为差异有统计学意义。me

6、ga，USA)；人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及2结果U266，用含20％胎牛血清RPMI1640培养基培养，2．1细胞形态学变化倒置相差显微镜观察RP—在37℃、5％CO、饱和湿度环境孵育。MI8226细胞半贴壁生长、U266细胞悬浮生长，致密1．2实验方法细胞团样，胞膜完整无破损，胞质透明无颗粒。经1．2．1TRAIL干预取对数生长期的RPMI8226TRAIL5g／ml处理后24h可以见到典型的凋亡形细胞及U266细胞，调整细胞密度为2×10／ml，接态学改变，表现为部分细胞悬浮，折光性减低，细胞种于24孔培养板，分别加入终浓度为

7、O．5、1．0、体积变小、变形。随着药物浓度的增加及药物作用2．0、5．0、10．0ml的TRAIL，作用24h后收集细时间延长，悬浮细胞明显增加，出现细胞培养液混胞。浊，折光性进一步减低，并且出现细胞裂解碎片。而63山东医药2010年第50卷第l期U266细胞的形态学无明显变化。执行激酶Caspase。3和剪切Bid。后者促使线粒体2．2TRAIL受体mRNA水平表达DR5mRNA仅膜渗透性通透孔开放，实现跨膜电位丢失，细胞色素表达于RPMI8226细胞中(见图1)，DcR1mRNA仅C(cytC)外溢至胞质，迅速诱导细胞凋亡的发生。表达于

8、U266细胞中(见图2)。而DR4和DcR2在TRAIL凋亡途径在胸腺细胞发育、病毒感染细胞和RPMI8226与U266细胞中未见表达。自身反应T细胞的清除及NK细