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《人多发性骨髓瘤细胞株rpmi8226和u266对trail耐药的机制探讨》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、山东医药2010年第50卷第31期人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266对TRAIL耐药的机制探讨浦践一,魏晓璇,沈扬(华北煤炭医学院附属医院,河北唐山063000)摘要:目的探讨人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266对TRAIL耐药的机制。方法将人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266进行培养、传代,分别加入终质量浓度为0.5、1.0、2.0、5.0、10.0g/ml的TRAIL分别作用12、24和48h后收集细胞。通过倒置显微镜观察TRAIL作用前后RPMI8226及U266细胞形态学变化检测细胞凋亡情况,通过半定量
2、RT-PCR方法检测TRAIL受体mRNA水平。结果随着药物浓度的增加及药物作用时间的延长,RPMI8226细胞凋亡的数量增加,而U266细胞形态并无明显变化。TRAIL受体DR5mRNA在RPMI8226中的表达水平高于U266,而DcR1mRNA在U266中的表达水平高于RPMI8226(P均<0.05)。结论TRAIL可通过DR5受体诱导的凋亡途径诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞凋亡,而U266细胞则可通过DcR1受体干扰凋亡信号传导,从而对TRAIL耐药。关键词:肿瘤坏死因子TRAIL;人多发性骨髓瘤细胞株;耐药中图分类号
3、:R733.3文献标志码:B文章编号:1002-266X(2010)31-0063-02TRAIL是肿瘤坏死因子(TNF)家族中的重要一1.2.2细胞形态学观察倒置显微镜下观察不同员,其生物学特点是仅诱导多种组织来源的肿瘤细浓度的TRAIL作用后RPMI8226及U266细胞的形胞、转化细胞或病毒感染细胞凋亡,而对正常组织细态学变化。胞没有影响。目前已发现5种TRAIL受体,分别是1.2.3TRAIL受体mRNA表达检测收集TRAIL死亡受体DR4、DR5,诱捕受体DcR1、DcR2和可溶作用后的RPMI8226细胞及U266细胞,Tfizo
4、l提取性受体Oseoprotegerin(OPG)。DR4和DR5均含有细胞总RNA,电泳鉴定RNA并定量,逆转录合成“死亡结构域”,可通过死亡受体信号传导途径诱导cDNA。采用半定量RT—PCR法。取上述8l产物凋亡的发生;而DcR1和DcR2均缺乏细胞内信号传经2%琼脂糖凝胶电泳50min,在读胶仪(AlphaIm—导系统,不能将凋亡信号向下传递,但均能竞争性与agerl200)上进行扫描,相应位置上显示有条带者,TRAIL结合,干扰凋亡信号的传导。2008年l2月为有目的基因的表达。各基因mRNA的相对表达~2009年12月,我们观察了
5、TRAIL对RPMI8226水平以其各自的灰度值除以相同标本B—actinmR—和U266的形态及其TRAIL受体表达水平的影响,NA的灰度值表示。探讨TRAIL对人多发性骨髓瘤的作用机制及细胞1.3统计学方法采用SPSS10.0统计软件。计对其的耐药机制。量数据以x4-s表示。对资料进行正态性检验和方1材料与方法差齐性检验。采用ANOVA方差分析,方差齐组间1.1材料Triol、逆转录反应体系及总RNA提纯两两比较采用q检验,方差不齐组间两两比较采用t试剂盒(北京赛百盛);琼脂糖及绿色体系(Pro—检验。P≤O.05为差异有统计学意义。me
6、ga,USA);人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及2结果U266,用含20%胎牛血清RPMI1640培养基培养,2.1细胞形态学变化倒置相差显微镜观察RP—在37℃、5%CO、饱和湿度环境孵育。MI8226细胞半贴壁生长、U266细胞悬浮生长,致密1.2实验方法细胞团样,胞膜完整无破损,胞质透明无颗粒。经1.2.1TRAIL干预取对数生长期的RPMI8226TRAIL5g/ml处理后24h可以见到典型的凋亡形细胞及U266细胞,调整细胞密度为2×10/ml,接态学改变,表现为部分细胞悬浮,折光性减低,细胞种于24孔培养板,分别加入终浓度为
7、O.5、1.0、体积变小、变形。随着药物浓度的增加及药物作用2.0、5.0、10.0ml的TRAIL,作用24h后收集细时间延长,悬浮细胞明显增加,出现细胞培养液混胞。浊,折光性进一步减低,并且出现细胞裂解碎片。而63山东医药2010年第50卷第l期U266细胞的形态学无明显变化。执行激酶Caspase。3和剪切Bid。后者促使线粒体2.2TRAIL受体mRNA水平表达DR5mRNA仅膜渗透性通透孔开放,实现跨膜电位丢失,细胞色素表达于RPMI8226细胞中(见图1),DcR1mRNA仅C(cytC)外溢至胞质,迅速诱导细胞凋亡的发生。表达于
8、U266细胞中(见图2)。而DR4和DcR2在TRAIL凋亡途径在胸腺细胞发育、病毒感染细胞和RPMI8226与U266细胞中未见表达。自身反应T细胞的清除及NK细
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