多发性骨髓瘤细胞株rpmi8226上清液抑制成骨

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1、多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226上清液抑制成骨【摘要】目的:探讨多发性骨髓瘤细胞上清液在体外抑制成骨祖细胞早期分化的现象。方法:以多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226上清加入到成骨祖细胞MC3T3-E1rBMP2诱导分化体系中培养6d后，计数碱性磷酸酶染色结节并以RT-PCR方法测定碱性磷酸酶和骨钙素mRNA水平。结果:MC3T3-E1诱导组和30%的骨髓瘤上清干预组的染色结节计数分别为（20.33±5.16）/低倍视野和（13.66±2.80）/低倍视野（P<0.05）。此外，30%上清

2、干预组的碱性磷酸酶mRNA水平低于诱导组（P<0.05），而骨钙素mRNA水平差异无显著性（P>0.05)。结论:多发性骨髓瘤细胞RPMI8226上清液能够抑制rBMP2诱导的成骨祖细胞MC3T3-E1早期分化过程。【关键词】多发性骨髓瘤成骨祖细胞成骨分化Abstract:Objective:ToinvestigatetheeffectofsupernatantfromMutiplemyelomacellsRPMI8226ontheearlystageofosteoblastdiff

3、erentiationinvitro.Methods:ThesupernatantfromMutiplemyelomacellsRPMI8226oftheosteoblastdifferentiationRNAofALPandOCRNARNAinbothgroupination（P>0.05).Conclusion:ThesupernatantfromMutiplemyelomacellsRPMI8226inhibitsthetheearlystageofosteoblastMC3T3-E

4、1differentiationyeloma;osteoblast;osteoblastdifferentiation多发性骨髓瘤是一种常见血液系统肿瘤多发性疾病，主要病理改变是由于浆细胞克隆性恶性增生，并大量分泌蛋白和小分子因子，破坏了破骨细胞和成骨细胞在正常组织中形成的平衡状态，从而引起骨质破坏[1，2]。75%多发性骨髓瘤患者伴有骨痛、骨质疏松、骨质破坏、病理性骨折或高钙血症等[3]。目前国内外对多发性骨髓瘤的分子机制研究集中于破骨细胞的激活机制，而成骨细胞抑制的机制不明。我们采用多发性骨

5、髓瘤细胞株RPMI8226上清液与成骨祖细胞株MC3T3-E1相互作用培养后，以碱性磷酸酶结节染色和RT-PCR法检测碱性磷酸酶和骨钙素mRNA水平来揭示在体外骨髓瘤细胞上清液对成骨细胞分化成熟过程的影响。1材料和方法1.1材料人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226，浙江大学医学院血液研究所金洁教授惠赠（ATCC编号:CCL-155）。鼠胚成骨祖细胞MC3T3-E1购于武汉大学细胞保藏中心(CCTCC编号:CRL-2593)。DMEM-低糖培养液购于GIBCO公司。碱性磷酸酶染色试剂盒购于上海虹桥

6、医用试剂公司。Trizol购于Invitrogen。RTkit、PCRmix购于Fermantas公司。PCR引物合成于上海生工。rBMP2购于RD公司。1.2方法1.2.1成骨祖细胞株MC3T3-E1的培养和诱导分化：培养成骨祖细胞株MC3T3-E1用含有10%胎牛血清的DMEM低糖培养基的完全培养基并在37℃、5%CO2的条件下培养，待细胞长至90%左右融合时传代于培养六孔板。诱导分化：取细胞状态良好的融合细胞1:3传代，取MC3T3-E1细胞5×104个接种于六孔板中，3h后待细胞完全贴壁

7、后吸取上清后，加入3ml含50ng/mLrBMP2的上述培养体系，3d后换液，培养6d后收获细胞。1.2.2多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的培养和上清收集：多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226以完全培养基在37℃、5%CO2的条件下培养，细胞悬浮，取2×105/ml细胞接种于75cm2培养瓶培养3d，取细胞悬液置于3管15ml离心管，1000r/min，5min离心后用孔径为0.22μm的无菌过滤器过滤，置于无菌离心管中于-70℃低温冰箱保存。1.2.3多发性骨髓瘤细胞上清对成骨祖细胞分化的影

8、响：将诱导分化培养的成骨祖细胞分为①空白对照组：予完全培养基。②诱导分化组：予含50ng/mlrBMP2的完全培养基。③20%上清干预组：予含20%骨髓瘤细胞上清、50ng/mlrBMP2的完全培养基。④30%上清干预组：予含30%骨髓瘤细胞上清、50ng/mlrBMP2的完全培养基。取MC3T3-E1细胞5×104个于六孔板中培养，3d后换液，6d后收获细胞。1.2.4碱性磷酸酶染色检测：取培养好的细胞，弃上清，按上海虹桥医用试剂公司碱性磷酸酶试剂盒操作说明染色，10×10倍倒置显微镜下双盲法