微生物实验报告——真菌的观察.pdf

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1、微生物学实验报告酵母菌形态观察、大小测定和计数，放线菌和霉菌形态观察2012/4/26实验目的：1.观察酵母菌的形态和出芽生殖，学习显微镜镜台测微尺和目镜测微尺的使用，并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。2.学习并熟练掌握血细胞计数板测定微生物细胞大小的方法。3.学习掌握扦片法观察放线菌的形态特征。4.学习掌握载玻片法观察霉菌的形态特征。实验原理：1.微生物大小的测定。显微镜测量微生物大小需借助目镜测微尺和镜台测微尺的配合。镜台测微尺是一张中央封固有标准刻度的特制载玻片，刻尺总长1mm，划分为10个大格和100个小格，每小格长度为0.01mm。镜台测微尺的作用是校正目镜测微尺每格的相

2、对长度。目镜测微尺是一块中央有精确等分刻度的圆形玻璃片，可嵌入目镜内焦点处。使用前需用镜台测微尺校正，获得一定放大倍数的目镜和物镜下每小格所代表的相对实际长度。2.显微计数法。显微计数法是将少量样品的悬浮液置于一种具有确定容积的载玻片上，在显微镜下直接观察、计数的方法。本实验使用血细胞计数板对酵母菌进行计数。血细胞计数板是由4条沟槽和3个平台构成的特制载玻片，中间较宽的平台被横槽隔成两半，每一边的平台上刻有一个方格网，中间的大方格即为计数室。2血细胞计数板的大方格分两种规格：25×16和16×25，都有400个小格。每一个大方格的面积为1mm，3盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间计数室

3、的容积为0.1mm。计数时，通常数5个中方格的总菌数，求得平均值后可计算出1ml菌液中的总菌数。3.酵母菌形态观察。酵母菌是单细胞个体，大小是细菌的几倍到几十倍，大多数出芽生殖，也可通过产生子囊孢子有性生殖。酵母菌的观察一般采用美兰染液水浸片法，因为普通的涂片法可能损伤酵母菌细胞。采用美兰染液水浸片法还可以鉴别酵母菌的死活。酵母菌活细胞新陈代谢具有较强的还原能力，可以将美兰显蓝色的氧化型转变为无色的还原型，而死细胞和代谢能力微弱的衰老细胞还原能力弱，染色后呈蓝色或淡蓝色。（上图）酵母菌出芽生殖1/114.放线菌形态观察。放线菌是一种革兰氏阳性细菌，菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和孢子丝组

4、成。放线菌的观察一般采用扦片法或玻璃纸法。扦片法是将灭菌的盖玻片斜插入接种有放线菌的平板，使放线菌沿盖玻片和培养基交接处生长，附着在盖玻片上，从而有利于观察放线菌的完整形态和不同生长时期。5.霉菌形态观察。霉菌是一种真菌，菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比放线菌的菌丝粗几倍到几十倍。本实验采用载玻片培养观察法，即在无菌操作的情况下，将霉菌接种到载玻片上的琼脂薄层，这样霉菌孢子萌发后可以在盖玻片和载玻片之间的空间生长，从而容易观察其完整的结构和不同的生长时期。青霉菌属多细胞真菌，整个菌丝体分为伸入营养基质中吸取营养的基质菌丝和伸向空气中的气生菌丝，菌丝有横隔，分生孢子梗

5、亦有横隔，细胞内通常为多核。其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。黑曲霉菌丛呈黑褐色，菌丝发达，多分枝，是有多核的多细胞真菌。分生孢子梗由特化了的厚壁而膨大的菌丝细胞（足细胞）上垂直生出，分生孢子头状如“菊花”，分生孢子为球形，呈黑、黑褐色，平滑或粗糙。2/11根霉的菌丝无隔膜，营养菌丝体上产生匍匐枝，匍匐枝的节间形成特有的假根，从假根处向上丛生直立、不分枝的孢囊梗，顶端膨大形成圆形的孢子囊，囊内产生孢囊孢子。孢子囊内囊轴明显，球形或近球形，囊轴基部与梗相连处有囊托。毛霉菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能广泛蔓延，无假根或匍匐菌丝。菌丝体上直接

6、生出单生、总状分枝或假轴状分枝的孢囊梗。各分枝顶端着生球形孢子囊，内有形状各异的囊轴，但无囊托。囊内产大量球形、椭圆形、壁薄、光滑的孢囊孢子。（上图）毛霉的形态实验材料：酿酒酵母斜面，酿酒酵母悬液，青色链霉菌斜面，弗氏链霉菌斜面，青霉斜面（5d），黑曲霉斜面（5d），黑根霉斜面（5d），毛霉斜面（5d）实验用品：0.05%和0.1%吕氏美兰染液，镜台微尺，目镜微尺，血细胞计数板，1ml移液器及枪头，培养皿，载玻片及盖玻片，U形玻璃管，滤纸，镊子，解剖刀，20%甘油，高氏Ⅰ号培养基（可溶性淀粉20g/L，KNO31g/L，NaCl0.5g/L，K2HPO40.5g/L，MgSO40.5

7、g/L，FeSO40.01g/L，琼脂20g/L），马铃薯培养基-PDA（马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15-20g/L）实验步骤：1.酵母菌的观察。⑴.在载玻片中央滴加一滴0.1%吕氏碱性美兰染液，无菌操作用接种环从酿酒酵母斜面培养物挑去少量菌体于染液中，混合均匀。⑵.在液滴上轻轻加盖一张盖玻片。⑶．将载玻片放置3min后，用显微镜观察酵母菌的形态、出芽生殖和假菌丝，根据酵母菌的颜色区分细胞死活。⑷.染色30min后再次观察，注意死活细胞的比