内皮祖细胞鉴定方法.doc

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1、大鼠骨髓EPC的鉴定：①EPC培养约2周后达到80%～90%融合，以0.25%胰酶+0.01%EDTA消化，传代至24孔板中，待细胞贴壁完全后用Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色鉴定。细胞在含Dil-ac-LDL(10μg/mL)的培养液中避光孵育10h，然后以2%的中性甲醛固定10min，PBS液漂洗后再加FITC-UEA-1(10μg/mL)避光孵育1h。PBS液漂洗后在荧光显微镜下观察，显示红色荧光的为ac-LDL阳性细胞，显示绿色荧光的为UEA-1阳性细胞，显示双荧光阳性(黄色)的细胞被认为是EPC，随机计数10个非重叠视野，计算双阳性细胞比例。同时以大鼠主动脉内皮细

2、胞为阳性对照，大鼠主动脉平滑肌细胞为阴性对照。2、流式细胞仪检测细胞表型。取培养14天的EPC细胞1×10的6次方进行流式细胞仪检测，分别检测CD34+、CD133+、vWF+、Flk-1+细胞所占的比例。需要一定数量培养EPC过程中EPC的显微镜下照片