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《同位素稀释-高效液相色谱-质谱联用技术检测》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第40卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第10期2012年10月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1567~1572DOI:10.3724/SP.J.1096.2012.20249同位素稀释-高效液相色谱-质谱联用技术检测大鼠血浆中的芥子气水解产物*李春正陈佳钟玉环钟玉绪谢剑炜李桦(军事医学科学院毒物药物研究所,北京100850)摘要应用同位素稀释-高效液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS),建立了同时定量检测血浆中芥子气水解代谢产物硫二甘醇(TDG)和二羟乙基亚砜(TDGO)的方法。应用甲醇和乙腈混合溶剂沉淀染毒大鼠血浆
2、中蛋白,采用ZORBAX-C18色谱柱(100mm×3.0mm,3.5mm),以5mmol/L甲酸铵-甲醇梯度洗脱分离待测物。以d8-TDG为内标,在正离子多反应监测模式下定性和定量分析TDG和TDGO。方法学验证结果表明,TDG在5~800mg/L和TDGO在0.5~80.0mg/L范围内均呈良好的线性关系(r2>0.991),定量限分别为5和0.5mg/L,加标回收率在101%~118%之间,方法的日内和日间精密度(RSD)均小于10%。对SD大鼠(n=6)采用皮下注射方式进行染毒后采样测定,代谢动力学参数计算结果显示,TDG和TDGO的达峰时间(tmax)分别为30
3、和60min,峰值浓度(cmax)为(1724±227)mg/L和(301±115)mg/L,血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)为(3286±249)mg·h/L和(1010±363)mg·h/L。关键词芥子气;硫二甘醇;二羟乙基亚砜;液质联用;血浆;毒代动力学1引言芥子气是一种强效的糜烂性毒剂,它在第一次世界大战中被迅速武器化,并在1917年应用于实战,随即被纳入了多国的化学武器储备。尽管芥子气进入战争时间较晚,但中毒造成的伤亡人数超过了其[1]它所有类型毒剂的总和,最近一次确证使用发生在20世纪80代的两伊战争。为制止化学武器对人类的危害,1997年正式生效的《化学武
4、器公约》对化学武器的生产、使用、贮备及销毁作出了详细规定,并针对已有的化学战剂、前体及有毒化学品进行了分类清单管理,芥子气作为最重要的化学战剂之一被列[2]入清单一(Schedule1)。二战结束后,侵华日军在我国领土上遗留了大量化学武器,芥子气是其中主要的填充战剂。这些遗留化学武器多被日军掩埋和藏匿,弹体和容器腐蚀严重,毒剂泄漏已对我国环境和人民生命健康造成很大威胁,近年来因遗留化学武器引起的人员伤亡时有报道。芥子气暴露引起的损伤通常存在1~12h的无症状潜伏期,导致芥子气中毒诊断和治疗的延误,并由此产生严重后果,特别是对芥子气意外事故中的中毒人员。因此,建立准确、灵敏
5、、快速的生物样品中芥子气及相关物质的分析方法,实现早期中毒诊断是芥子气医学防治研究的重要内容。芥子气进入体内后可迅速发生水解/氧化反应,生成硫二甘醇(TDG)和二羟乙基亚砜(TDGO)等代谢产物(结构见图1)。在芥子气损伤人员的血液、尿、组织液及皮下组织中都可检测到TDG,尿样中的[3][4]TDG和TDGO的浓度较高,且可以持续数日至一周。美军《化学防护手册》已将TDG作为芥子气中图1芥子气及TDG和TDGO的化学结构Fig.1Chemicalstructuresofsulfurmustardanditshydrolysis/oxidationproducts毒的临床诊
6、断指标之一。目前报道TDG和TDGO的生物医学检测样本主要以尿样为主,检测技术以气[4~7]相色谱-质谱联用法(GC-MS)为主。但GC-MS方法需先用TiCl3将TDGO还原为TDG,通过固相萃2012-03-12收稿;2012-05-15接受本工作系国家“重大新药创制”科技重大专项(2008ZXJ09006-001,2010ZXJ0900X-003-002)资助*E-mail:amms_hli@126.com1568分析化学第40卷取等技术手段实现样品净化,再经过衍生化后,才可检测分析。该方法中样品前处理过程复杂繁琐,耗[8,9]时较长。相对于尿样,血浆样品则能够反映
7、毒剂及其相关物质在血循环中的实时暴露水平,以及对严重中毒伤员具有采样及时方便等优点,因此,能够在芥子气暴露确证中提供更直接的证据。本研究基于高效液相色谱-串联四极杆质谱联用技术,应用稳定性同位素化合物为内标,实现了对TDGO的直接检测,建立并验证了同时测定血浆样品中TDG和TDGO的定量分析方法。本方法灵敏快速、操作简便、重现性好,可实时监测染毒大鼠血浆中芥子气暴露标志物TDG和TDGO的浓度,并成功应用于大鼠皮下染毒芥子气的毒物代谢动力学研究。2实验部分2.1仪器与试剂TMACQUITY型超高效液相色谱仪(UPLC,美国Wa
