不同分子量的角叉菜(chondrusocellatus)

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1、第40卷第5期海洋与湖沼Vol.40,No.52009年9月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICASep.,2009不同分子量的角叉菜(Chondrusocellatus)*λ-卡拉胶的抗氧化活性111122周革非邢荣莲孙利芹滕立张全斌徐祖洪(1.烟台大学海洋学院烟台264005;2.中国科学院海洋研究所青岛266071)提要从角叉菜中提取λ-卡拉胶,利用密闭微波法进行降解,得到5种不同分子量的产品:650、240、140、15、9.3kDa。红外、紫外和化学分析结果表明,这些卡拉胶样品具有相似的组成和结构,这表明微波法不会改变多糖的

2、组成和结构。体外实验结果表明,角叉菜λ-卡拉胶及其降解产物对超氧−阴离子(O2)、有机自由基DPPH、H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血以及小鼠肝匀浆脂质过氧化作用均有不同程度的抑制作用,其中对小鼠肝匀浆脂质过氧化作用的抑制作用最显著,不同分子量的角叉菜λ-卡拉胶对多种自由基均有较好的清除作用,其中对小鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用最显著,分子量对抗氧化活性有较显著的影响。关键词角叉菜,λ-卡拉胶,微波降解,分子量,抗氧化中图分类号Q539自由基医学的研究表明,炎症、肿瘤、组织缺血Zhouetal,2004,2005,2006),因此具有潜在的药用再灌注损伤

3、均与活性氧引发的脂质过氧化密切相关价值。但是对角叉菜中提取的卡拉胶的抗氧化活性以(Cuzzocreaetal,2001),寻找抑制自由基和脂质过氧及分子量与活性的关系却未见报道,为了探讨不同化的物质越来越受到生物学家和医学家们的重视。近分子量的角叉菜λ-卡拉胶的体内抗肿瘤和免疫调节年来,海藻硫酸多糖显著的抗氧化活性已经引起了作用机理,本文中作者对不同分子量λ-卡拉胶的体外广泛关注(Ruperezetal,2002;Zhangetal,2003)。抗氧化活性进行了初步的研究。卡拉胶是存在于某些红藻细胞间的一种具有1实验材料特殊性质的多糖,它是由半乳糖及半乳

4、糖的衍生角叉菜(Chandra’socelots),采于青岛太平角,剔物组成的大分子。卡拉胶主要含有两种级分:κ型和除杂藻,洗净,自然晾干,塑料袋封口保存。λ型。其中λ型卡拉胶含(1→3)连接的β-D-半乳糖-2-硫酸酯和(1→4)连接的α-D-半乳糖-2,6-二硫酸酯2研究方法(Rees,1963),由于含有较多的硫酸基,所以比其2.1多糖的提取与分级它类型具有更好的生物活性(师然新等,2000)。2.1.1提取按藻水比为1︰80加料,沸水浴加热角叉菜是生产卡拉胶的重要原料,自然分布于并不断搅拌1h,纱布过滤,滤渣重复提取一次,合并我国福建、广东、台湾

5、等沿岸。另外在青岛和大连等两次提取液,于高速冷冻离心机10000r/m离心30min海域也有较多的分布。角叉菜卡拉胶具有多方面的生后取上清,蒸馏水透析24h,在冰箱中冻透过夜,物活性,例如抗病毒、抗肿瘤、降血糖、增强机体免95%酒精融化脱水,浸洗二次,干燥得粗多糖。疫力和防止溃疡等(Rossetal,1987;霍玉书等,1995;2.1.2分级在经典的Smith分级法(Smithetal,*山东省中青年科学家科研奖励基金项目,2008BS06012号和中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室开放基金资助项目,LMB071005。周革非,博士,副教授,E

6、-mail:zhougf3325@sina.com收稿日期:2008-07-15,收修改稿日期:2009-05-15546海洋与湖沼40卷1956)基础上加以改进。将粗多糖加入25倍的水中,苯后,以50%乙醇配成120μmol/L的溶液。加0.1ml加热溶解,加入KCl至最终浓度为0.3mol/L,在冰水多糖与1.9mlDPPH在室温下静置20min后测定浴中搅拌1h,5000r/m离心30min,上清液冻透过夜,525nm的吸光值(彭长连等,2000)。95%酒精脱水烘干得λ-型角叉菜多糖(PC1)。2.6对H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血实验2.2λ

7、-卡拉胶的降解和粘度、分子量的确定健康的昆明种小鼠眼眶取血,加肝素溶液(根据2.2.1降解将λ-卡拉胶配成1%的溶液,控制一取血量定)制成抗凝血,2000r/m离心10min,移弃血定的条件(表1),在光纤自控密闭微波消解系统中进浆和白细胞,往沉淀的红细胞中加入等渗的生理盐行密闭降解,分别得到四个不同粘度的降解产物水,混匀,2000r/m离心10min,弃上清,如此反复2(PC2、PC3、PC4、PC5),乌氏粘度计测定粘度分别次洗涤红细胞,将红细胞制成0.5%的悬浮液。取红为883,371,239,122,23。细胞悬液1ml,加不同多糖样品,最后加1

8、00mmol/L2.2.2粘度和分子量的测定以0.3%KCl为溶剂,的H2O2,

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1、第40卷第5期海洋与湖沼Vol.40,No.52009年9月OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICASep.,2009不同分子量的角叉菜(Chondrusocellatus)*λ-卡拉胶的抗氧化活性111122周革非邢荣莲孙利芹滕立张全斌徐祖洪(1.烟台大学海洋学院烟台264005;2.中国科学院海洋研究所青岛266071)提要从角叉菜中提取λ-卡拉胶,利用密闭微波法进行降解,得到5种不同分子量的产品:650、240、140、15、9.3kDa。红外、紫外和化学分析结果表明,这些卡拉胶样品具有相似的组成和结构,这表明微波法不会改变多糖的

2、组成和结构。体外实验结果表明,角叉菜λ-卡拉胶及其降解产物对超氧−阴离子(O2)、有机自由基DPPH、H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血以及小鼠肝匀浆脂质过氧化作用均有不同程度的抑制作用,其中对小鼠肝匀浆脂质过氧化作用的抑制作用最显著,不同分子量的角叉菜λ-卡拉胶对多种自由基均有较好的清除作用,其中对小鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用最显著,分子量对抗氧化活性有较显著的影响。关键词角叉菜,λ-卡拉胶,微波降解,分子量,抗氧化中图分类号Q539自由基医学的研究表明,炎症、肿瘤、组织缺血Zhouetal,2004,2005,2006),因此具有潜在的药用再灌注损伤

3、均与活性氧引发的脂质过氧化密切相关价值。但是对角叉菜中提取的卡拉胶的抗氧化活性以(Cuzzocreaetal,2001),寻找抑制自由基和脂质过氧及分子量与活性的关系却未见报道,为了探讨不同化的物质越来越受到生物学家和医学家们的重视。近分子量的角叉菜λ-卡拉胶的体内抗肿瘤和免疫调节年来,海藻硫酸多糖显著的抗氧化活性已经引起了作用机理,本文中作者对不同分子量λ-卡拉胶的体外广泛关注(Ruperezetal,2002;Zhangetal,2003)。抗氧化活性进行了初步的研究。卡拉胶是存在于某些红藻细胞间的一种具有1实验材料特殊性质的多糖,它是由半乳糖及半乳

4、糖的衍生角叉菜(Chandra’socelots),采于青岛太平角,剔物组成的大分子。卡拉胶主要含有两种级分:κ型和除杂藻,洗净,自然晾干,塑料袋封口保存。λ型。其中λ型卡拉胶含(1→3)连接的β-D-半乳糖-2-硫酸酯和(1→4)连接的α-D-半乳糖-2,6-二硫酸酯2研究方法(Rees,1963),由于含有较多的硫酸基,所以比其2.1多糖的提取与分级它类型具有更好的生物活性(师然新等,2000)。2.1.1提取按藻水比为1︰80加料,沸水浴加热角叉菜是生产卡拉胶的重要原料,自然分布于并不断搅拌1h,纱布过滤,滤渣重复提取一次,合并我国福建、广东、台湾

5、等沿岸。另外在青岛和大连等两次提取液,于高速冷冻离心机10000r/m离心30min海域也有较多的分布。角叉菜卡拉胶具有多方面的生后取上清,蒸馏水透析24h,在冰箱中冻透过夜,物活性,例如抗病毒、抗肿瘤、降血糖、增强机体免95%酒精融化脱水,浸洗二次,干燥得粗多糖。疫力和防止溃疡等(Rossetal,1987;霍玉书等,1995;2.1.2分级在经典的Smith分级法(Smithetal,*山东省中青年科学家科研奖励基金项目,2008BS06012号和中国科学院海洋生物资源可持续利用重点实验室开放基金资助项目,LMB071005。周革非,博士,副教授,E

6、-mail:zhougf3325@sina.com收稿日期:2008-07-15,收修改稿日期:2009-05-15546海洋与湖沼40卷1956)基础上加以改进。将粗多糖加入25倍的水中,苯后,以50%乙醇配成120μmol/L的溶液。加0.1ml加热溶解,加入KCl至最终浓度为0.3mol/L,在冰水多糖与1.9mlDPPH在室温下静置20min后测定浴中搅拌1h,5000r/m离心30min,上清液冻透过夜,525nm的吸光值(彭长连等,2000)。95%酒精脱水烘干得λ-型角叉菜多糖(PC1)。2.6对H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血实验2.2λ

7、-卡拉胶的降解和粘度、分子量的确定健康的昆明种小鼠眼眶取血,加肝素溶液(根据2.2.1降解将λ-卡拉胶配成1%的溶液,控制一取血量定)制成抗凝血,2000r/m离心10min,移弃血定的条件(表1),在光纤自控密闭微波消解系统中进浆和白细胞,往沉淀的红细胞中加入等渗的生理盐行密闭降解,分别得到四个不同粘度的降解产物水,混匀,2000r/m离心10min,弃上清,如此反复2(PC2、PC3、PC4、PC5),乌氏粘度计测定粘度分别次洗涤红细胞,将红细胞制成0.5%的悬浮液。取红为883,371,239,122,23。细胞悬液1ml,加不同多糖样品,最后加1

8、00mmol/L2.2.2粘度和分子量的测定以0.3%KCl为溶剂,的H2O2,

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