现代仪器分析第十一章高效液相色谱.ppt

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1、第十一章高效液相色谱法(HPLC)HighProformanceLiquidChromatography11.1概述11.2高效液相色谱仪11.3流动相与固定相11.4检测器11.5高效液相色谱法的应用injectorcolumnovendetectorpumppumpHIGH-PRESSUREGRADIENTSYSTEMpumpmixerdataprocessorShimadzuSolventDeliveryPumpPlungerReciprocatingPumpLC-10ADVP:DualplungerwithparallelflowlineLC-10ATVP:Dualplungerwit

2、htandemflowlineHigh/LowpressuregradientsystemmixerlowpressuregradientdevicehighpressuregradientsystemlowpressuregradientsystemDegasUnitExtremelysmallfluctuationofpressurePressurefluctuationiscausedbyslowresponseofcheckvalve.Microcheckvaluedesigncanmakeresponsespeedhigh.FastResponseThisleakagewillc

3、ausepressuredrop.PARTSOFAHPLCSYSTEMrefillthesolventmotorSealsolventgearingThisvolumeisaround1L.A.SYRINGEPUMPmotorandcamplungerplungersealcheckvalvepumphead10-100uLPARTSOFAHPLCSYSTEMB.PLUNGERRECIPROCATINGPUMPPARTSOFAHPLCSYSTEMOUToilreserveoildiaphragmINpistonoilsealC.DIAPHRAGMPUMPPARTSOFAHPLCSYSTEMRh

4、eodyneManualInjectorINJECT/LOADPOSITION[INJECT]position[LOAD]position11.3固定相与流动相1液—液色谱2液—固色谱3离子交换色谱4凝胶色谱四类液相色谱1.反相色谱固定相为非极性物质疏水性流动相为极性溶液如甲醇或乙腈水溶液分离方式基于多次吸附-解吸的重复过程非极性化合物较极性化合物在柱中具有较强的保留2.正相色谱固定相是极性物质流动相是非极性或弱极性的溶液如正己烷或四氢呋喃如前所述分离过程也是基于被分离组分在流动相与固定相之间的分配平衡3.分子排阻色谱固定相由一些起分子筛作用的多孔材料组成较大的分子被较快地从色谱柱中洗脱较小分

5、子则滞留在填充材料的细小孔径中保留较长的时间。离子色谱法三种分离机理A.高效离子交换色谱法HPIC分离是基于发生在流动相和键合在基质上的离子交换基团之间的离子交换过程也包括部分非离子的相互作用这种分离方式可用于有机和无机阴离子和阳离子的分离B.高效离子排斥色谱HPICE分离是基于固定相和被分析物之间三种不同的作用-Donnan排斥空间排斥和吸附作用这种分离方式主要用于弱的有机和无机酸的分离C.流动相离子色谱法MPIC分离是基于被分析物在分析柱上的吸附作用分析柱的选择性主要取决于可动相的组成和浓度流动相除了加入有机改进剂之外还需加入离子对试剂这种分离方式可用于表面活性阴离子和阳离子以及过渡金属络

6、和物的分离。离子色谱的优点1速度一般10min即可分别完成阴阳离子的剖面2灵敏度直接进样可达ppb级用浓缩柱可达ppt级限制的因素是对普遍存在离子如Cl-和Na+的高灵敏度由此而存在的污染3选择性Dionex已有多种成熟的固定相以及选择性的检测器4多组分同时测定但对样品成分之间的浓度差太大的样品如半导体级化学试剂中杂质的测定有一定的限制5运行费用非常低勿需特殊试剂6柱填料在广的PH范围内和对有机试剂的稳定性广的应用范围及对复杂基体分析的可行性正相色谱NORMALPHASE硅胶Silicageltype:generaluse氰基Cyanotype:generaluse氨基Aminotype:fo

7、rsugaranalysisSilicagelSiSi-Si-CH2CH2CH2CN-Si-CH2CH2CH2NH2-Si-CH2CH2CH2OCH(OH)-CH2(OH)ModifiedSiWHATISTHEINTERACTION?Silicagel(polar)HydrogenbondingNon-polarRETENTIONTIMEANDHYDROGENBONDINGOHHOSiOHSiOH