痰标本直接涂片镜检标准规程.docx

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1、痰标本涂片镜检标准操作规程1.目的提高检出率，为临床诊断和治疗提供准确、及时、有效的依据，避免生物安全及职业暴露事故的发生。2.方法2.1标本信息的录入2.1.1按照要求将检测时间、患者姓名、性别、年龄、送检医生、患者编号（初、复检）、标本性状等信息填写入结核门诊检测登记本中2.1.2仔细核对所填写的信息是否与申请单信息一致，若不一致将该列用红色笔划去，并在备注栏注明原因；不可直接修改已填写好的信息2.1.3标本信息录入完毕后，可进行标本的处理2.2.标本的处理2.2.1涂片的制备2.2.1.1选择经干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻片制备涂片2.2.1.2在玻片的毛样端注明检测序列号2

2、.2.1.3小心打开盛装痰液标本的容器，防止产生气溶胶或标本外溢；仔细观察标本，使用折断棉签茬端，挑取标本中干酪样、脓样或可疑部分适量（约0.1ML），于玻片正面右侧2/3处，均匀涂抹成1cm×2cm的椭圆形痰膜注意：使用后的棉签茬应丢弃于黄色的专用塑料袋中2.2.1.4涂片自然干燥后，置于染色架上，玻片间的距离应大于1.5cm2.2.1.5用酒精火焰棒或酒精灯对涂片区域进行固定（5~8秒内将玻片置于火焰上迅速烤4~6次）2.2.2染色2.2.2.1将石炭酸复红染液滴加到制备好的涂片区域，火焰加热至出现蒸汽后脱离火焰，保持染色5分钟；染色期间应始终保持痰膜区域被染色液覆盖，必要时可持续

3、加入染液。注意加温时不要使染液沸腾。2.2.2.2流水从玻片序列号端轻缓冲洗，冲去染液，沥去玻片上剩余的水，从痰膜上端外缘滴加脱色剂布满痰膜，脱色时间为1分钟。如有必要，需流水洗去脱色液后，再次脱色至痰膜可视红色为止.流水从玻片一端轻缓冲洗，冲去染液，沥去玻片上剩余的水。2.2.2.3滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水从玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去玻片上剩余的水，待玻片干燥后镜检。2.2.3待检涂片检查2.2.3.1染色合格的涂片，由于被亚甲蓝染色而呈均匀亮蓝色，且无红色斑块；染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂布面积的10%2.3镜检2.3.1油镜下观察300个视野以上或者连续观察

4、5分钟2.3.2观察方法2.3.2.1使用10×目镜双目显微镜读片；2.3.2.2取染色完毕且已经干燥的玻片，痰膜向上放置在玻片台上并以卡尺固定；2.3.2.3首先使用40×物镜，转动卡尺移动玻片至痰膜左端，将光线调节至适当亮度，调节焦距至可见细胞形态；2.3.2.4移开40×物镜，在玻片上滴1-2滴镜油，使用100×油镜进行仔细观察。但应注意避免油镜镜头直接接触玻片上的痰膜。2.3.2.5读片时，首先应从左至右观察相邻的视野；当玻片移动至痰膜一端时，纵向向下转换一个视野，然后从右至左观察，以此类推；2.3.2.6在淡蓝色背景下，抗酸菌呈红色；其他细菌和细胞呈蓝色。2.3.2.7仔细观

5、察完300各视野，一般需要5分钟；每个工作日，一位镜检人员阅读玻片量不超过25张，且连续阅读10-12张玻片后应休息20分钟左右。2.4结果判断2.4.1阴性：镜检300个视野以上或连续观察5分钟未发现抗酸杆菌2.4.2阳性：阳性（300个视野内有1~8条抗酸杆菌）阳性1+（100个视野内有3~9条抗酸杆菌）阳性2+（10个视野内有1~9条抗酸杆菌）阳性3+（每个视野内有1~9条抗酸杆菌）阳性4+（每个视野内有9条以上抗酸杆菌）2.5结果报告与记录2.5.1将检测结果填写入申请单报告栏，报告格式如下:涂片1：阴性（-）镜检结果：涂片2：阴性（-）涂片3：阴性（-）2.5.2将检测结果记

6、录于结合门诊检测登记册中：涂片号标本性状检测结果例：1：D阴性（-）2：D阴性（-）3：D阴性（-）2.6痰涂片的保存2.6.1阅读完毕后的涂片，应及时用擦镜纸轻轻在涂片上揭取数次，彻底去除玻片上的镜油。2.6.2经脱油、干燥后的玻片，按实验室序号及涂片编号放置在玻片盒中，存放在阴凉干燥的环境中避光保存，以备复检或质控抽检。3.质控3.1质控周期阅片人员更换或每批次阅片前3.参考文献3.1卫生部疾病预防控制局、中国疾病预防控制中心《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》200902第一版