微生物学检验(第3版)2012不动杆菌与脑脊液.ppt

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1、1脑脊液标本的微生物检查及不动杆菌的培养鉴定不动杆菌革兰阴性球杆菌，单个或成双排列，有时呈丝状或链状；无芽孢、无荚膜，无鞭毛。不动杆菌属的细菌进行革兰染色时不易脱色，有时易染成革兰阳性，误认为是革兰阳性球菌，应注意鉴别。3氧化酶:-O/F：O硝酸盐还原:-KIA:K/K动力：-枸櫞酸盐利用:+注意与形态相似的奈瑟菌鉴别；注意与不分解糖的产碱杆菌鉴别5目的要求1.掌握脑脊液标本的细菌学检验和报告方法。2.掌握不动杆菌的培养特征、主要微生物特性及鉴定方法。6器材和试剂1、标本：脑脊液标本2、菌种：不动杆

2、菌3、培养基：血平板、中国蓝平板、巧克力平板、克氏双糖斜面培养基、半固体培养基、非发酵菌微量生化管。74、试剂：氧化酶纸片、3%过氧化氢、革兰染色液、无菌生理盐水及生化管配套试剂5、其它：显微镜、培养箱、小试管、载玻片、接种针、接种环、酒精灯、火柴、非发酵菌生化编码表等。器材和试剂8由临床医师以无菌方法采集脑脊液1-3ml，置于无菌试管中立即送检。标本的采集9脑脊液标本离心沉淀革蓝染色显微镜观察初步报告抗酸染色墨汁染色血平板巧克力平板罗氏培养沙保弱培养菌落、形态、生化血清学鉴定药敏试验最终报告检验程序

3、101、涂片检查：将脑脊液3000r／min离心10-15min，取沉淀涂片。1)革兰染色镜检：如查见革兰阴性、凹面相对的双球菌，分布在细胞内或外时，可报告“找到革兰阴性双球菌，位于细胞内(外)，形似脑膜炎奈瑟菌”；如查见革兰阳性、矛头状的双球菌，有明显的荚膜存在，可报告“找到革兰阳性双球菌，形似肺炎链球菌”。进一步用肺炎链球菌全价血清做荚膜肿胀试验，阳性者报告“荚膜肿胀试验检出肺炎链球菌”。如查见其他革兰阳性、阴性细菌，则根据细菌形态和染色性，报告“找到革兰×性×菌”。脑脊液标本检验操作流程及报告

4、方式112)墨汁染色：用墨汁负染，在黑暗的背景中见到折光性很强的菌体及周围透明的宽大荚膜，有时可见到长出的单芽，可报告“墨汁负染找到宽厚荚膜的单芽细胞，形似新型隐球菌”。也可用O.1％甲苯胺蓝染色法，新型隐球菌菌体呈红色，荚膜不着色，白细胞深蓝色，红细胞不着色。3)抗酸染色：取沉淀做小而集中的涂片，用抗酸染色后镜检，发现有红色的抗酸杆菌，可报告“找到抗酸杆菌”。脑脊液标本检验操作流程及报告方式122、培养普通培养：将脑脊液直接或经离心沉淀后，接种在血平板和巧克力平板上，分别放置在普通培养箱和5％-1

5、0％CO2培养箱中，35℃孵育18-24h。观察菌落形态，涂片染色观察。　　如为中等大小、半透明、灰蓝色、湿润的菌落，革兰阴性双球菌，氧化酶和触酶均阳性，只分解葡萄糖和麦芽糖，可报告“检出脑膜炎奈瑟菌”。就可参照“奈瑟菌属”的鉴定。脑脊液标本检验操作流程及报告方式13如在血平板上有草绿色溶血、扁平的小菌落生长，革兰阳性双球菌，触酶阴性，参照“链球菌属”进行鉴定。　　如果怀疑新型隐球菌感染或直接涂片发现有新型隐球菌，则接种沙保弱琼脂或血琼脂平板分别于25℃及35℃培养，一般2-3天长出白色或淡褐色

6、菌落。非致病性菌落35℃不生长。根据菌落形态、涂片染色、荚膜和生化反应等进行鉴定。参照“隐球菌属”。　如为其他形态的菌落和细菌，则参照相关均属进行鉴定。如经3天的培养未见细菌生长，可报告“经3天培养无细菌生长”。脑脊液标本检验操作流程及报告方式14革兰阳性细菌革兰阴性细菌球菌金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、B群链球菌、肺炎链球菌、消化链球菌脑膜炎奈瑟菌、卡他布兰汉菌杆菌结核分枝杆菌、产单核李斯特菌流感嗜血杆菌、大肠埃希菌、产气肠杆菌、肺炎克雷伯菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、不动杆菌、脑膜炎败血黄杆菌

7、、类杆菌其它新型隐球菌、白色念珠菌钩端螺旋体脑脊液标本常见的分离菌15注意事项1、标本采集应在抗菌药物使用前采取。2、引起脑膜炎的细菌都比较娇嫩，容易死亡或自溶，因此应立即送检并尽快处理，最好床边接种。流行性脑脊髓膜炎是法定传染病，从脑脊液中分离并鉴定出脑膜炎奈瑟菌，应按规定报告法定部门。从脑脊液中分离到的流感嗜血杆菌以B型菌为多，能产生TEM型β-内酰胺酶，对青霉素耐药，纸片法测定常不正确，需单独测定β-内酰胺酶。163、脑膜炎奈瑟菌对外界环境抵抗力差，特别对寒冷和干燥敏感，因此要注意将标本在25

8、-37℃保温，不可放置冰箱冷藏或低温保存。防止标本干燥和避免日光直接照射。注意事项17一、脑脊液标本分区画线接种到血平板、巧克力平板、中国蓝平板二、提供的菌落1、进行涂片G染色观察细菌形态；2、触酶试验、氧化酶试验；3、接种于半固体、克式双糖培养基；4、接种到各种非发酵菌生化鉴定培养基中；三、放入35℃恒温培养箱进行培养具体实验操作第一天的主要操作：18非发酵细菌生化鉴定编码表O-F试验4321氧化酶拘橼酸盐麦芽糖精氨酸酶精对甘露醇木糖硝酸盐还原DNA酶