微生物检验作业作业指导书..doc

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1、XXXXXXXX有限公司作业文件文件编号微生物检验作业指导书版本号页码1目的通过对微生物检测流程的规范确保检验工作有序进行。2范围适用于微生物检测的全过程。3职责3.1检验人员严格按检测流程做好各项工作。3.2检测主管做好监督检查工作。4内容4.1准备工作4.1.1卫生清洁整理普通检验室内的各类检验物品，检查工作台面和地面卫生。4.1.2样品收集登记4.1.2.1与收样员沟通，确定检样品种、数量（如仓库到货的茶原料、内包膜，车间生产的半成品、成品，研发样品，采购样品，稳定性试验的样品、定期跟踪检测的样品）。

2、4.1.2.2与质保员沟通，确定检样品种、数量（如自来水、纯水、一楼生产过程跟踪的各阶段液体）。4.1.2.3按检测计划自行确定的检样品种、数量（如工作间空气、设备内表面、员工手部）。4.1.2.4各项确定后，收集并登记样品。4.1.3检测方法的确定4.1.3.1样品收集后进行分类，确定样品的检测方法，若无方法的要尽快上报或查找相关方法。XXXXXXXX有限公司作业文件文件编号微生物检验作业指导书版本号页码4.1.3.2微生物各项目所采用的检测方法（见附表1）4.2试剂配制、物品包扎4.2.1玻璃容器的包扎

3、：灭菌前器皿应包扎紧密完整后才进行灭菌，以防止灭菌后器皿受到污染。4.2.2平皿、吸管按量分成若干单元用牛皮纸、报纸包扎；4.2.3试管及三角瓶应塞硅胶塞，在瓶口再用报纸包扎；4.2.4其它玻璃或金属取样工具也要用报纸包扎；4.2.5生理盐水按氯化钠加水比例0.84%配制；平板计数琼脂（PCA）、孟加拉红、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）则以标签上规定的比例进行配制。按需要量分装成于不同规格的容器中。4.3高压灭菌4.3.1培养基及器皿的灭菌：4.3.1.1高压蒸汽灭菌：金属

4、器具、玻璃器皿、基础培养基及其它耐热物品均放入锅内灭菌。4.3.1.2灭菌参数：121℃(0.1034MPa)，15~20min；4.3.2染菌培养物：121℃(0.1034MPa),30min;4.3.3含糖类不耐热培养基(按试剂要求)：115℃（0.0727MPa）,15~20min。4.3.4每次灭菌时均须将灭菌指示带置于灭菌锅内，观察灭菌效果。4.3.5灭菌锅的使用：参照“仪器使用维护保养作业指导书”的相关内容执行。4.4烘干高压蒸汽灭菌后的物品除培养基及稀释液外的其他物品，如玻璃平皿吸管、金属器具

5、或棉花等均应先置于105℃烘箱内，根据包装大小应保持1h以上，至干燥后使用。4.5贮存4.5.1灭菌后处理：灭菌后物品，注意放置场所，严禁与未灭菌物品混放,XXXXXXXX有限公司作业文件文件编号微生物检验作业指导书版本号页码以免再度污染。4.5.2灭菌合格的培养基及稀释液先贮存于消毒柜，臭氧消毒并低温烘干瓶口包扎纸，存放一般不超过24h，当天未使用完的置于4℃冰箱存放，3天内使用完。培养基及稀释液的配制数量应以适量为宜。4.5.3烘干后合格的灭菌物品应存放于贮藏室或消毒柜内,灭菌后保存最长不得超过3天。4

6、.5.4包装损坏或塞子脱落者，不可作为无菌品使用。4.6无菌室的消毒4.6.1超净台的使用4.6.1.1使用前应先用75%酒精棉擦拭台面，再打开超净配备的紫外灯，照射时间不少于30min；4.6.1.2使用时,应关闭紫外灯,打开日光灯,同时打开无菌风直至实验结束；4.6.1.3超净台灭菌效果应以落菌实验加以验证；4.6.2无菌间使用前后应将门关紧，打开悬吊式紫外灯消毒，应选用30W,距离在1．0m处，照射时间不少于30min；4.6.3缓冲间的使用：微检员工作时穿的衣帽、鞋等物品需放置在缓冲间。并于实验前后

7、打开紫外灯，照射时间不少于30min。4.7检测过程4.7.1操作过程要求无菌；4.7.2进入缓冲间后用75%的酒精棉球消毒双手，换上已消毒的专用工作服、帽、口罩及鞋；4.7.3接种样品时，应再用75%的酒精棉球消毒双手；4.7.4检品须称量的要保证重量准确，且要尽快加入至稀释液中；4.7.5检样液瓶口应尽快塞紧硅胶塞，将其样液充分摇匀；XXXXXXXX有限公司作业文件文件编号微生物检验作业指导书版本号页码4.7.6从包装中取出吸管时，尖端不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖端不得触及试管或

8、平皿；4.7.7接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰灭菌。接种环和接种针在接种细菌前后应经火焰灼烧全部金属丝，必要时要烧到环和针的连接处。火焰灭菌的有效范围以火焰为中心半径9cm内。4.7.8倾倒培养基至平皿中摇匀放置；4.7.8检品检测完毕时，要求做空白对照；4.7.9不同检品要根据各自特性综合考虑，如选择的检测项目、稀释度等（附表1的相关内容）；4.7.10打开包装