试验5：柱色谱分离实验.ppt

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1、柱色谱了解：1.柱色谱法分离有机物的原理。2．固定相和流动相的选择原则。掌握：1.色谱柱的填充方法。2．柱色谱分离的基本操作。一、实验目的柱色谱分离示意图混合物吸附剂(固定相)洗脱剂(流动相)二、实验原理二、实验原理吸附剂的性质：均匀、表面积大、不反应、吸附能力不同化合物的结构：化合物的吸附性和它们的极性成正比洗脱剂的极性：溶解度适中、不反应、易获取回收影响分离效果主要因素3.试样成分的性质在给定的条件下，各个成分的分离情况，与被分离物质的结构和性质有关，对极性吸附剂而言，被分离物质的极性越大，两者吸附作用也越强。具有极性基团的化合物，其吸附能力按下列顺序增加：Cl－，Br，I

2、

3、倒满溢出。装住过程中要不断的敲打柱子，使硅胶沉淀均匀、密实。五、实验操作步骤3、加样：待溶剂石油醚至硅胶层相平时，用滴管吸取分离混合物，向色谱柱中滴加5-8滴，至混合物完全渗入到硅胶中。(混合物为：苏丹三、偶氮苯的苯溶液，注：不能用极性大的溶剂溶解混合物，否则柱色谱不能分离。4.洗脱：用滴管吸取纯的石油醚沿管壁加入到色谱柱中，注意滴加过程沿色谱柱壁加入，防止硅胶层溅起。继续加入石油醚，当黄色组分被洗脱至与红色组分完全分离后可用洗脱液（石油醚：乙酸乙酯=9:1）洗脱，直至所有物质都被洗脱完全。4、产品收集：分别收集不同颜色的产物及洗脱剂，并量取和记录各自的体积。六、注意1、吸附剂

4、的选择和活化2、洗脱剂的选择：对未知样品先用极性小的溶剂洗脱，再用极性大的溶剂洗脱3、装柱的技术：松紧度4、吸附剂的用量：是被分离样品量的30-40倍,有时需增加至100倍5、柱高：柱子太高洗脱慢样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面。加样三、实验内容洗脱在柱顶不断加入洗脱剂，使洗脱剂永远保持有适当的量，不要让洗脱剂表面流干，使流动相流速适当。三、实验内容试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后分别收集各个组分。收集试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样的

5、分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小，分离效果越好。三、实验内容三、实验内容鉴定试样有色依据颜色直接鉴定试样无色可结合薄层色谱结果玻砂防堵塞装柱需紧密加压不可大溶剂勿流干四、注意事项色谱法在有机化学中的应用:分离混合物精制提纯化合物利用比移值(Rf)鉴定化合物跟踪反应进程小结色谱法的特点:分离效率高复杂混合物,同系物,异构体等。灵敏度高可以检测出μg•g-1(10-6)级甚至ng•g-1(10-9)级的物质量。分析速度快几分钟或几十分钟内可以完成一个试样分析。小结柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝实验原理甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:甲基橙亚甲基蓝由于甲基橙和亚

6、甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。三、实验内容装柱加样洗脱收集鉴定干法：10g硅胶+乙醇先用乙醇后用水操作组分颜色组分颜色1mL样品加样操作0.5mL×2乙醇洗涤柱色谱操作：实验步骤:仪器和试剂1.仪器锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱2.试剂柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲基橙、亚甲基蓝。H2O∶ 95 %

7、乙醇 = 1∶ 1 (A 液)0. 2mol· L-1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)实验步骤装柱：1、装色谱柱：（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂直固定在铁架台上。(2)关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的1/2）（3）填吸附剂：称取10g硅胶于小烧杯中,加入15mL蒸馏水,用玻璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱,使其逐渐沉入底部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型瓶承接,控制滴速为1滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（，操