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《课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (3).pptx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、目标导航预习导引1.研究培养基对微生物的选择作用。2.进行微生物数量的测定。目标导航预习导引一二三一、研究思路1.筛选菌株尿素是一种重要的农业氮肥,但不能直接被农作物吸收利用,只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后,才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素,是因为它们能合成脲酶。(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等),同时抑制或阻止其他微生物生长。(2)选择培养基:在微生物学中,将允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基,称做
2、选择培养基。目标导航预习导引一二三2.统计菌落数目(1)常用来统计样品中活菌数目的方法是稀释涂布平板法。即当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数低。这是因为当两个或多个细胞在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。因此,统计结果一般用菌落数来表示。(2)显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。目标导航预习导引一
3、二三3.设置对照(1)设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响,提高实验结果的可信度。(2)对照实验是指除了被测试的条件以外,其他条件都相同的实验,其作用是比照实验组,排除任何其他可能原因的干扰,证明确实是所测试的条件引起相应的结果。目标导航预习导引一二三二、实验设计实验设计包括对实验方案,所需仪器、材料、用具和药品,具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。某土壤样品中细菌的分离与计数实验的操作步骤如下。1.土壤取样土壤中的微生物70%~90%是细菌,绝大多数分布在距地表3~8cm
4、的近中性的潮湿土壤中。2.样品的稀释样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。通常选用一定稀释范围的样品液进行培养,以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量,一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养。第一次实验时,可将稀释范围放宽一点,以保证能从中选择出适于计数的平板。目标导航预习导引一二三3.微生物的培养与观察不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30~37℃的温度下培养1~2d,放线菌一般在25~28℃的温度下培养5~7d,而霉菌
5、一般在25~28℃的温度下培养3~4d。每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。一般来说,在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间),同种微生物表现出稳定的菌落特征。菌落的特征包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面。土壤有“微生物的天然培养基”之称,为什么?提示:土壤具备了各种微生物生长所需的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件,是微生物生活的良好环境。目标导航预习导引一二三三、对分离得到的分解尿素的细菌的鉴定1.检测pH
6、的变化在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨。氨会使培养基的碱性增强,pH升高。因此,可以通过检测培养基pH的变化来判断该化学反应是否发生。2.利用指示剂在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细菌后,如果pH升高,指示剂将变红,说明该种细菌能够分解尿素。知识梳理典例透析一二三四一、选择培养基1.选择培养基的制作(1)依据某些微生物对某种物质的抗性,在培养基中加入此种物质,以抑制对该物质不具抗性的微生物生长,而不影响对该物质具有抗性的微生物生长。如培养基中加入高浓度食盐溶液
7、,可抑制多种细菌的生长,但不影响金黄色葡萄球菌的生长,从而可将该菌分离出来;在培养基中加入青霉素,可抑制细菌、放线菌的生长,从而分离得到酵母菌和霉菌。(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的。培养基中缺乏氮源时,可分离固氮微生物,非固氮微生物因缺乏氮源而无法生存;培养基中若缺乏有机碳源,则异养微生物无法生存,而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物。知识梳理典例透析一二三四(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物。如当石油是唯一碳源时,可抑制不能利用石油的微生物生长,使能够利用石油的微生物
8、生存,从而分离出能消除石油污染的微生物。(4)通过某些特殊环境分离微生物。如在高盐环境中可分离得到耐盐微生物,其他微生物在盐浓度高时因易失水而不能生存;在高温环境中可分离得到耐高温的微生物,其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。2.利用选择培养基分离能分解尿素的微生物的原理分离能分解尿素的微生物所用的选择培养基的氮源只有尿素。只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,缺乏脲酶的微生物不能分解尿素,因缺乏氮源而不能生长、繁殖,所以
