课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptx

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1、尿素分子的立体结构CO（NH2）2+H2OCO2+2NH3脲酶课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。㈠.筛选菌株PCR技术是一种常用的DNA扩增技术，此项技术的自动化，需要使用耐高温的DNA聚合酶，如果请你来找这种耐高温的酶，你会去哪里找？热泉70-80摄氏度的高温条件淘汰了绝大多数微生物，而耐热的Taq细菌脱颖而出。水生耐高温细菌Taq1、实验室微生物的筛选原理（P21）人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等

2、），同时抑制或阻止其他微生物生长。（一）筛选菌株一、研究思路2、选择培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。（一）筛选菌株一、研究思路加入青霉素的培养基——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是是什么物质？碳源是葡萄糖和尿素，氮源是尿素2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？如果有，又是如何进行选择的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此，原则上只有能够利用尿素

3、的微生物才能够生长。阅读22页本课题使用的培养基配方（二）统计菌落数目显微镜直接计数法稀释涂布平板法（活菌计数法）（二）微生物计数1、显微镜直接计数法1mm一、研究思路每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。1mm下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数是多少?1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3

4、）5AB×1045A缺点：不能区分死菌与活菌2、统计菌落数目——稀释涂布平板法思考1：为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活菌的数目？当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数在30~300的平板进行计数。【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL）A.2.34×108B

5、.2.34×109C.234D.23.4思考2：如何根据平板上的菌落数推测出每mL样品中的菌株数？【解析】选B。稀释倍数为106，0.1mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。每mL样品中的菌株数=（C÷V）×MC：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V：涂布平板时所用的稀释液的体积M：稀释倍数思考3：统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是低，为什么？低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌

6、落数而不是活菌数来表示。第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。实例分析1启示在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性。在分析实验结果时，一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验。实例分析2想一想：A同学和其他同学所得实

7、验结果差异如此之大，请分析原因可能有哪些？①②实例分析2想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？一种方案：可以由其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。实例分析想一想：你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？另一种方案：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。实验结果要有说服力，对照的设置是必不可

8、少的！实例启示设置对照实验的目的是什么？排除实验操作、培养条件等无关变量对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。（三）实验基本原则1、平行重复原则2、对照原则3、单一变量原则一、研究思路实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验原理：实验目的：材料用具：方法步骤：1、分组编号2、处理（遵循实验设计的基本原则）对照原则、单一变量原则（等量原则）科学性原则、平行重复原则可行性原则3、观察记录（设计观察记录表）实验预期：实验结果的分析与评价：实验结论：二、实验设计实验设计土壤中分解尿素的细菌的分离