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时间：2020-04-12
《硝酸还原酶（NR）活性的测定.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在PPT专区-天天文库。
1、硝酸还原酶(NR)活性的测定制作人：车永梅单位：生命科学学院一、实验目的了解硝酸还原酶在氮代谢中的地位，掌握硝酸还原酶活性测定的方法。二、实验原理植物吸收的硝酸根离子，首先通过硝酸还原酶的催化，被还原成亚硝酸根离子。其反应如下：NO3-+NADH+H+→NO2-+NAD++H2O产生的亚硝酸根离子可以从组织内渗到外界溶液中，测定反应液中亚硝酸含量，通过一定公式计算就可得硝酸还原酶活性的大小。亚硝酸离子的测定用比色法。其反应如下：对氨基苯磺酸(或磺胺)+2H++NO2-→叠氮化合物叠氮化合物+α-萘胺（或盐酸萘乙二胺）→偶氮化合物(红色)生成
2、的红色偶氮化合物在520nm波长比色，其光密度值与NO2-含量成正比。二、实验材料待测植物组织三、方法步骤1．绘制标准曲线：试剂（ml）1234567NaNO2标准液(5微克／ml)00.10.20.40.60.81蒸馏水10.90.80.60.40.20对氨基苯磺酸(或磺胺)2222222盐酸萘乙二胺(或α-萘胺)2222222每管含NaNO2的微克数00.512345试管号2.取样按下式计算酶活性：3.NaNO2含量测定五、实验结果查表值×(46/69)材料鲜重（g）×反应时间NR活性（gNO2-/gFW·h）＝六、思考题1.NR活性测
3、定时取材前为什么要进行一段时间光合作用？2.测定酶促反应时为什么要在暗处保温？3.NR活性测定时加入磺胺、盐酸萘乙二胺和KNO3的作用各是什么？
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