酸性染料比色法.ppt

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1、第五章中药制剂中各类化学成分分析药物分析学科掌握中药制剂中生物碱、黄酮、三萜皂苷、醌类成分的定性、定量原理与方法。熟悉中药制剂中挥发性成分、木质素类成分的定性、定量原理与方法。了解其他成分（有机酸类、环烯醚萜类、香豆素类、单萜及二萜类、多糖类）的分析方法。【目的要求】药物分析学科第五章中药制剂中各类化学成分分析学习方法结构性质分析方法结构：母核、官能团、分子量等物理化学性质：溶解性、酸碱性、挥发性、氧化还原性、旋光性、光谱特性等分析方法：总类成分：化学分析法、分光光度法单一成分：各种色谱法（GC、HPLC、HPCE、TLCS、S

2、FC等）药物分析学科第一节生物碱类成分分析一、概述1、概念：生物碱是生物界除生物体必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白质和B族维生素等）之外的所有含氮有机化合物，因其结构中氮原子上的未共享电子对而大多具有碱性。2、含生物碱成分的常用中药：中药名称主要生物碱成分中药名称主要生物碱成分山豆根制川乌马钱子延胡索苦参碱、氧化苦参碱、槐果碱、金雀花碱乌头碱、次乌头碱、新乌头碱马钱子碱、番木鳖碱（士的宁）、伪马钱子碱、伪番木鳖碱延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片碱、黄连碱苦参麻黄黄连黄柏防己苦参碱、槐定碱、槐果碱、氧化苦参碱麻黄碱、伪麻黄碱、去甲麻黄碱、

3、甲基麻黄碱小檗碱、巴马丁、药根碱、黄连碱小檗碱、药根碱、木兰花碱粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱、木兰碱药物分析学科第一节生物碱类成分分析二、理化性质1、溶解性大多数生物碱难溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有机溶剂；与酸结合成盐后水溶性增加，但酸不同，生成的盐水溶性有差异；季铵型生物碱、有氮氧配位键的生物碱易溶于水液体生物碱及一些小分子固体生物碱则既溶于水也可溶于有机溶剂；含有酸性官能团或酯键的生物碱还可溶于一些碱液或热苛性碱液。药物分析学科第一节生物碱类成分分析二、理化性质2、沉淀反应大多数生物碱在酸性水溶液中可以与某些试

4、剂生成不溶于水的复盐或分子复合物。生物碱沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子有机酸马钱子散中生物碱成分的鉴别取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。药物分析学科第一节生物碱类成分分析二、理化性质3、显色反应生物碱在一定pH条件下可与一些酸性染料（多为磺酸肽类）生成有色络合物，可被氯仿等有机溶剂定量提出结构中具有酯键的酯碱如乌头碱等可与异羟肟酸铁试剂反应产生紫红色；这些特点可用于中药制剂中生物碱成分的分析药物分析学科第一节生物碱

5、类成分分析二、理化性质4、紫外光谱特性结构中具有共轭体系的生物碱均有紫外吸收结构中的氮原子与发色团直接连接或参与发色团的生物碱，其吸收峰位置与测定时溶剂的pH有关。药物分析学科第一节生物碱类成分分析三、定性鉴别1、一般理化鉴别沉淀反应是生物碱理化鉴别常用方法，此反应一般在酸性水溶液中进行制备样品供试液时必须净化处理，防止假阳性结果药物分析学科第一节生物碱类成分分析三、定性鉴别2、薄层色谱法①吸附剂：硅胶、氧化铝；②展开剂：多以氯仿、苯等低极性溶剂，加入其他溶剂调整展开剂的极性；③由于硅胶显弱酸性，强碱性的生物碱在硅胶色谱板上能形成盐，

6、使Rf值很小或拖尾、形成复斑等。④显色剂：常用改良碘化铋钾试剂，有时喷碘化铋钾试剂之后再喷硝酸钠试剂，可使样品斑点更加清晰。如有荧光，不用显色⑤亦可用碘蒸汽、硫酸铈、碘铂酸等其他的试剂显色。讨论：如何改进？药物分析学科第一节生物碱类成分分析三、定性鉴别3、纸色谱法可用于生物碱盐或游离碱的鉴别4、HPLC：保留时间定性5、GC：可用于小分子生物碱的鉴别药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（一）总生物碱的含量测定1、化学分析法①主要使用酸碱滴定法。②强碱滴定生物碱盐时，在70%~90%的乙醇介质中终点比在水中明显，因此常将生物碱

7、盐溶于90%乙醇，再用标准碱乙醇液滴定。③若选择的溶剂及指示终点方法合适，还可用非水滴定法进行④要求：总生物碱的纯度较高，用于药味少成分简单制剂的测定药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（一）总生物碱的含量测定2、分光光度法（1）直接测定法①不经过化学反应、利用生物碱物质自身的光吸收直接进行比色测定的方法。②一般用于药味较少、干扰小的中药制剂中总生物碱的含量测定。药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定（一）总生物碱的含量测定（2）酸性染料比色法（例题P101）原理：BH++In-→BH+·In-（水相）→BH+·In

8、-（有机相）关键：酸性染料的选择：甲基橙、溴麝香草酚兰（BTB）和溴甲酚绿等；pH值的选择：与生物碱和酸性染料的性质有关。有机溶剂的选择：一般用氯仿、二氯甲烷水分的干扰及消除药物分析学科第一节生物碱类成分分析四、含量测定