乳腺癌外周血 Midkine mRNA的表达及其临床意义的研究.doc

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1、乳腺癌外周血MidkinemRNA的表达及其临床意义的研究作者：顾禾韩霜陈守华张丽丽【摘要】目的：检测乳腺癌患者血清中期因子(Midkine,MK)mRNA的表达，探讨乳腺癌患者血清中MKmRNA表达的意义。方法：应用RT-PCR方法检测42例乳腺癌患者血清中MKmRNA的表达，并与25例良性乳腺疾病患者血清对照。结果：42例乳腺癌患者中％外周血可检测出MKmRNA,而对照组中只有％阳性表达。在乳腺癌患者中，MKmRNA的表达与浸润程度、淋巴转移有关，与肿瘤直径的大小、肿瘤分化等级无关。结论：乳腺癌患者血清中MKmRNA的表达与肿瘤的生成、发展

2、及转移、浸润程度有关，有望成为判断乳腺癌转移、复发的重要指标。【关键词】乳腺肿瘤・中期因子・基因・淋巴转移【ABSTRACT]ObjecpressionofMidkine(tientswithbreasteasignificance・MethoMKmRNAin42casesofbsesofbenignbreastddinbloodsamplesusitionpolymeTasechaitive:TodeteettheexMK)mRNAinserumofpancerandevaluateitsds:Theexpressionofreastcanc

3、erand25caiseasesweredetectengreversetranscripnreaction(RT—PCR)・ResuItsApositive,whileonlenignbreastwassignonsbetweenitsexpreonandlymphnodemetaearnddifferentiatioed(P>)・Conclusiontantroleinthetumorigenesis,progressiAmongthe42casesofbreastcancer,33caseswereMKmRNy2positivecases

4、inbificantlycoirelatissionandinfiltTatistasis,buttumorsizndegreewereunrelatMKmRNAplaysanimporon,metastasisandinfiltrationofbreastcancer.［KEYWORDSjBreasttumor桝idkineGene

5、合性生长因子中期因子在乳腺癌中的高表达是促进肿瘤生长、发展的重要因素，并且与肿瘤的浸润转移关系密切［1］。本研究采用RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血清MKmRNA的表达，探讨其在乳腺癌发生过程的临床意义。1资料与方法一般资料收集山东大学附属千佛山医院甲状腺乳腺外科XX年7月一XX年7月乳腺癌患者42例，均为女性，年龄28〜79岁，中位年龄46岁。所有病例均按照美国癌症联合委员会乳腺癌TNM分期进行分类，其中I期18例，II期13例，111期9例，IV期2例；组织学类型：浸润性导管癌32例，导管内癌7例，鳞状细胞癌1例，髓样癌1例，黏液腺癌1

6、例；腋窝淋巴结转移31例，无转移11例。另选25例同期来我院检查治疗的良性乳腺疾病患者为对照组。所有病例均为病理组织学检查确诊，采血前均未接受化学治疗和放射治疗。试剂与仪器主要仪器和试剂包括淋巴细胞分离液和焦碳酸二乙酯，TRIZOL,RT-PCR试剂盒，基因扩增仪。引物设计合成参照相关文献及NCBI检索信息[2],由上海生物工程公司提供人工合成。MK引物序列：上游5’-ATGCAGCACCGAGGCTTCCT-3',下游5'-ATCCAGGCTTGGCGTCTAGT-37；B-actin引物序列：上游5’-CCCTGGACTTCGAGCAAGA

7、GAT-3',下游5'-GTTTTCTGCGCAAGTTAGG-3z.检测方法细胞提取抽取入选患者外周血mL,枸椽酸钠抗凝，为避免因针头在穿刺中沾染上皮细胞而导致假阳性结果，在抽取样本血前弃血lmL。所有抗凝管、注射器、Tip头、mL离心管及mLPCR薄壁管均经焦碳酸二乙酯水处理，去除RNA酶。用淋巴细胞分离液进行有核细胞的分离，再加入Trizol试剂后放入-8(TC冰箱保存备用。RNA提取标本血的单个核细胞中加入TrizollmL,室温放置5min,加入mL氯仿，室温震荡15s，放置5min,4°C12000r/min离心15min,吸取上清

8、液至另一管中，加入mL异丙醇，室温下放置30min,4°C10000r/min离心5mino弃上清，加入75%乙醇ImL,振荡器混匀，4175OOr/