乳腺癌外周血 midkine mrna的表达及其临床意义的研究

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1、乳腺癌外周血MidkinemRNA的表达及其临床意义的研究作者：顾禾　韩霜　陈守华　张丽丽【摘要】目的：检测乳腺癌患者血清中期因子(Midkine，MK)mRNA的表达，探讨乳腺癌患者血清中MKmRNA表达的意义。方法：应用RT-PCR方法检测42例乳腺癌患者血清中MKmRNA的表达，并与25例良性乳腺疾病患者血清对照。结果：42例乳腺癌患者中78.57％（33/42）外周血可检测出MKmRNA，而对照组中只有8.70%（2/33）阳性表达（χ2=31.283，P＜0.001）。在乳腺癌患者中，MKmRNA的表达与浸润程度、淋巴转移有关（P＜0.05），与肿瘤直径的大小、肿瘤分化等

2、级无关（P＞0.05）。结论：乳腺癌患者血清中MKmRNA的表达与肿瘤的生成、发展及转移、浸润程度有关，有望成为判断乳腺癌转移、复发的重要指标。【关键词】乳腺肿瘤·中期因子·基因·淋巴转移【ABSTRACT】0bjective：TodetecttheexpressionofMidkine(MK)mRNAinserumofpatientswithbreastcancerandevaluateitssignificance．Methods：TheexpressionofMKmRNAin42casesofbreastcancerand25casesofbenignbreastdiseas

3、esweredetectedinbloodsamplesusingreversetranscription8polymerasechainreaction(RT-PCR)．Results：Amongthe42casesofbreastcancer,33cases（78.57％）wereMKmRNApositive,whileonly2positivecasesinbenignbreastdiseases（χ2=31.283，P<0.001）.Therewassignificantlycorrelationsbetweenitsexpressionandinfiltration

4、andlymphnodemetastasis（P<0.05），buttumorsizeanddifferentiationdegreewereunrelated(P>0.05).Conclusion：MKmRNAplaysanimportantroleinthetumorigenesis,progression,metastasisandinfiltrationofbreastcancer.【KEYWORDS】Breasttumor·Midkine·Gene·Lymphnodemetastasis　　乳腺癌是我国女性最常见的恶性肿瘤之一。乳腺肿瘤的生长是个长期过程，往往

5、在明确诊断时已出现了远处的微转移，探讨如何早期检测乳腺癌的转移是当前研究的热点之一。最新研究发现，肝素结合性生长因子中期因子（midkine,MK）在乳腺癌中的高表达是促进肿瘤生长、发展的重要因素，并且与肿瘤的浸润转移关系密切［1］。本研究采用RT-PCR方法检测乳腺癌患者外周血清MKmRNA的表达，探讨其在乳腺癌发生过程的临床意义。1　资料与方法81.1　一般资料　收集山东大学附属千佛山医院甲状腺乳腺外科2006年7月―2007年7月乳腺癌患者42例，均为女性，年龄28～79岁，中位年龄46岁。所有病例均按照美国癌症联合委员会乳腺癌TNM分期（2006年版）进行分类，其中Ⅰ期18

6、例，Ⅱ期13例，Ⅲ期9例，Ⅳ期2例；组织学类型：浸润性导管癌32例，导管内癌7例，鳞状细胞癌1例，髓样癌1例，黏液腺癌1例；腋窝淋巴结转移31例，无转移11例。另选25例同期来我院检查治疗的良性乳腺疾病患者为对照组。所有病例均为病理组织学检查确诊，采血前均未接受化学治疗和放射治疗。1.2　试剂与仪器　主要仪器和试剂包括淋巴细胞分离液和焦碳酸二乙酯（南京生兴生物技术有限公司），TRIZOL（Promega公司），RT-PCR试剂盒（Promega公司），基因扩增仪（TC－25/H，杭州博日科技有限公司）。引物设计合成参照相关文献及NCBI检索信息[2]，由上海生物工程公司提供人工合成

7、。MK引物序列:上游5′-ATGCAGCACCGAGGCTTCCT-3′，下游5′-ATCCAGGCTTGGCGTCTAGT-3′；β-actin引物序列：上游5′-CCCTGGACTTCGAGCAAGAGAT-3′，下游5′-GTTTTCTGCGCAAGTTAGG-3′.1.3　检测方法1.3.1　细胞提取　抽取入选患者外周血5.08mL，枸橼酸钠抗凝，为避免因针头在穿刺中沾染上皮细胞而导致假阳性结果，在抽取样本血前弃血1mL。所有抗凝管、注射器、Tip头、1.5m