DB22T 2260-2015 鹿鞭鉴定方法 PCR 法.pdf

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1、ICS67.120B45备案号：44981-2015DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2260—2015鹿鞭鉴定方法PCR法IdentificationofSikaDeerandWapitiPizzles----PolymeraseChainReactionMethod本标准仅供内部使用不得翻印2015-02-01发布2015-03-01实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2260—2015本标准仅供内部使用不得翻印前言本标

2、准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院特产研究所。本标准主要起草人：邢秀梅、吴琼、杨福合、苏伟林、邵元臣、查代明、荣敏、刘华淼、徐佳萍、杨颖、涂剑锋、张铁涛。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2260—2015本标准仅供内部使用不得翻印鹿鞭鉴定方法PCR法1范围本标准规定了梅花鹿鞭、马鹿鞭（塔河马鹿除外）的PCR鉴定方法。本标准适用于梅花鹿

3、鞭、马鹿鞭（塔河马鹿除外）的真伪鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。本标准仅供内部使用不得翻印3.1鹿鞭pizzle梅花鹿、马鹿的外生殖器，包括阴茎及睾丸。4原理针对梅花鹿、马鹿线粒体DNA（mtDNA）的D-loo

4、p区特异性基因序列设计引物，应用聚合酶链反应（PCR）技术扩增特异性DNA片段，根据是否扩增出特异性片段对鹿鞭进行鉴定。5试剂和材料除非另有说明，所有的化学试剂均为分析纯。实验用水规格应符合GB/T6882中二级水的规定。5.1引物上游引物：5’-CAAAGCACGTGATATAACCTTATG-3’下游引物：5’-ATCTAGTGCTCGAATTAATGGTAC-3’5.2试剂5.2.1氯化钠（NaCl），CAS号7647-14-5。5.2.2氯化镁（MgCl2·6H2O），CAS号7791-18-6。

5、5.2.3氢氧化钠（NaOH），CAS号1310-73-2。1DB22/T2260—20155.2.4琼脂糖，CAS号9012-36-6。5.2.5三羟甲基氨基甲烷（Tris），CAS号77-86-1。5.2.6十二烷基磺酸钠（SDS），CAS号2386-53-0。本标准仅供内部使用不得翻印5.2.7乙二胺四乙酸二钠盐（Na2EDTA），CAS号15708-41-5。5.2.8盐酸（HCl），CAS号7647-01-0。5.2.9三氯甲烷（氯仿），CAS号67-66-3。5.2.10冰乙酸，CAS号64-

6、19-7。5.2.11无水乙醇，CAS号64-17-5。5.2.12Tris饱和酚，CAS号108-95-2。5.2.13TritonX-100，CAS号9036-19-5。5.2.1475%乙醇。5.2.15酚﹕氯仿混合液（体积比1﹕1）：Tris饱和酚、氯仿等体积混合，置于棕色瓶中，4℃保存。5.2.16dNTP溶液（市售）：含dATP、dTTP、dCTP、dGTP，各2.5mmol/L。5.2.1710×PCRBuffer缓冲液（不含氯化镁）（市售）：100mmol/LKCl，160mmol/L(N

7、H4)2SO4，20mmol/LMgSO4，200mmol/LTris-HCl(pH8.8)，1%TritonX-100，1mg/mLBSA。5.2.18TaqDNA聚合酶（5U/µL）。5.2.19溴化乙锭（10mg/ml）：称量100mg溴化乙锭溶解于10mL水中，然后分装成1mL/份，4℃避光保存。5.2.2010mMTris：称量24.22gTris溶于160ml蒸馏水中，加浓HCL调pH至8.0，最后定容至200mL,常温保存。本标准仅供内部使用不得翻印5.2.210.5mol/lEDTA：称量

8、186.1gEDTA溶于800mL蒸馏水中，加NaOH调pH至8.0，最后定容至1000mL，高压灭菌后，常温保存。5.2.2210%SDS：称量10.0gSDS溶于100mL蒸馏水中，55℃水浴锅中助溶。5.2.2320mg/mL蛋白酶K：称量100.0mg蛋白酶K溶于5ml无菌去离子水（ddH2O）中，分装成1mL/份，-20℃保存。5.2.2450×TAE：称量242.0gTris溶于700mL蒸馏水中，加入57.1mL