试验七人类巴氏小体的观察.ppt

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1、实验七、人类细胞巴氏小体(Barrbody)的观察一、实验目的：学习和掌握人体Barr小体的制片技术；观察Barr小体；了解Barr小体数目与人类性别畸形的关系；了解异固缩现象。二、实验原理：巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。Lyon的剂量补偿学说认为：女性虽然有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质，与只有1个X染色体的男性是一样多的。1949年，Barr等在雌猫的神经元细胞中发现一种浓缩小体，称Barr小体。而雄猫无。1955年，Barr在女性的口腔细胞中发现Barr小体。1959年，人们把性染色体异

2、常造成的畸形与巴氏小体的研究联系起来。1971年，Barr小体被称为X染色质。食道癌病人巴氏小体出现率低于10%；正常人细胞出现率为20-45%女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个晚复制，没有活性。该失活的X染色体在形态上呈异染色质状态，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密。XYXXX染色质的失活只是部分失活，仍然有部分基因具有转录活性，目前已知的大约有十几个基因有活性。Barr小体的数目=n-1(n为X染色体数目)性染色体类型巴氏小体数目正常男性XY0正常女性XX1Turner’ssyndromeXO0Klinefe

3、lter’ssyndromeXXY1超雌综合症XXX2雌性染色体类型雄性染色体类型果蝇XXXY线虫XXXO雌性染色体类型雄性染色体类型果蝇XXXY线虫XXXO在果蝇中，雌性中的两条X染色体都有活性，而在雄性XY或XO中唯一的一条X染色体超活性;线虫的剂量补偿机制是在XX个体为雌雄同体，两条X染色的连锁基因的转录活性同时减弱，使之处于低活性状态，即每条X染色体基因的表达水平是单条X染色体（雄性中）的表达水平的一半，以便实现与雄性（XO）个体的，只具一条X染色体上连锁基因活性的剂量补偿。巴氏小体鉴别特征一般出现在细胞分裂周期的

4、间期；直径为1μm左右；一般位于核膜内侧边缘；形状多样，多为半圆形，三角形等形状；材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。3.观察在女性间期细胞核内侧靠近核膜处有约1微米大小的反光极强的颗粒状亮点，即为巴氏小体。材料不同，观察结果可能有不同，且必须和核仁区别开来（核仁往往离核膜较远或接近核中央部位）。三、实验材料：男、女性口腔颊部粘膜上皮细胞、头发根部的毛囊细胞粘膜上皮细胞个体较大，容易观察，但易污染细菌等杂质；头发毛囊细胞个体稍小，观察稍困难，优点是不受细菌污染。四、实验

5、器具及用品：实验器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌牙签等。实验药品和试剂：1、1N或5N盐酸，或浓盐酸和95％乙醇1：1的混合液。2、改良苯酚品红染色液。五、实验步骤：（一）口腔粘膜细胞Barr氏小体显示方法：1、取材与固定：实验前用可食用水漱口，然后以无菌牙签刮取口腔颊部粘膜(第一次的刮取物弃去)，将刮取物均匀涂于载玻片上，放在空气中干燥5-10min。滴加1N盐酸水解3-5min。水洗3次。2、染色与观察：用改良苯酚品红染液染色1-2分钟，倾斜载玻片，倒掉染液。用吸水纸轻轻擦拭干载玻片上的染液。加盖玻片后放于显微镜下观

6、察。也可以考虑用Giemsa染色：用Gimsa染液染色8-10分钟，勿干燥，用水冲洗后，晾干，镜检。五、实验步骤：（二）发根毛囊细胞Barr氏小体显示方法：1、取材：取带有发根的头发，围绕发根部的1圈长2-3mm的白色物体，即是毛囊细胞团，将其放置于载片上。在毛囊细胞处滴加一滴浓盐酸和95％乙醇1：1的混合液。约10min以后，可使毛囊细胞得到充分软化。以清水冲洗2-3遍，将酸解液冲洗干净。拿起上述发根的梢部，将其上毛囊细胞轻轻蹭于另一干净载片上即可达到转移的目的。2、染色：可滴加1滴染液于待测细胞上，注意染液不可过多，以

7、免细胞流失。约2-3min后，加盖玻片即可进行观察。六、注意事项：1.在制备口腔粘膜细胞时，一定刮取细胞膜、核膜完整的、细胞核未解体的口腔粘膜细胞。2.取清洁的毛囊；一根发根的毛囊细胞可以转移到1-2张载片上，以达到充分利用实验材料的目的。酸洗后，要将盐酸清洗干净。染色时间不要太长，否则核质着色深，X染色质不易区分。5.低倍镜下检出典型的可数细胞，其标准是：--细胞周围无细菌污染；--细胞轮廓清楚、核膜清晰；--核无缺损；核染色清晰适度；核质呈网状或细颗粒状。6.今天需要使用油镜，用后请搽拭干净。七、实验结果和作业：1.分

8、别观察50个男、女性可数的细胞，计算各自的带有Barr小体的细胞所占的百分比。2.在观察中画出1个典型细胞，标明Barr小体的部位。八、思考题：1．男性没有巴氏小体的理论基础。2．男变女的变性手术后，该女性有无巴氏小体？3．性别畸形的染色体模式可能有几种？2021/9/2017女性细胞12021/9/2