实验5病原性球菌.ppt

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1、实验五病原性球菌实验目的：熟悉几种常见病原性球菌的形态染色特点。掌握血浆凝固酶试验的原理、方法、意义。掌握抗“0”试验的原理、方法及临床意义。一、常见病原性球菌形态染色的观察（示教）（细菌的形态；革兰染色性；排列方式）二、血浆凝固酶试验（示教)三、抗“0”试验(操作)实验内容：球菌革兰染色标本片葡萄球菌培养物、兔血浆、生理盐水、载玻片、接种环、酒精灯、火柴、蜡笔待测病人血清、抗“O”试剂（溶血素“O”、ASO胶乳）、反应板、搅拌棒实验用品：一、病原性球菌形态特征的观察又称为化脓性球菌根据革兰染色性的不同可分成革兰阳性：葡萄球菌链球菌肺炎链球菌革兰阴性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈

2、瑟菌革兰染色阳性球菌，葡萄串状排列无鞭毛，不形成芽胞，右上图：革兰染色右下图：扫描电镜形态与染色葡萄球菌革兰染色阳性球菌，呈链状排列无鞭毛，不形成芽胞，右上图：革兰染色右下图：扫描电镜形态与染色链球菌形态与染色肺炎链球菌革兰染色阳性球菌，菌体呈矛头状，成双排列，宽端相对，尖端向外。无鞭毛不形成芽胞有毒株有荚膜革兰染色阴性双球菌呈肾形，成双排列感染急性期位于中性粒细胞内形态与染色奈瑟菌属二、血浆凝固酶实验血浆纤维蛋白原纤维蛋白血浆凝固酶附着于细菌表面玻片上形成凝块（结合型）试管中血浆发生凝固（游离型）致病性葡萄球菌原理（1）取洁净玻片一张，玻片分为左右两区并做好标记，于

3、一端加生理盐水一滴，另一端加兔血浆一滴。（2）用接种环取金黄色葡萄球菌苔一环，在玻片一端生理盐水中研磨混匀，接种环灭菌后再取金黄色葡萄球菌苔一环，在另一端兔血浆中研磨均匀。（3）立即观察结果。血浆凝固酶实验方法（玻片法）结果：细菌在生理盐水无凝集而在血浆中聚集成团块或无法混匀，为血浆凝固酶试验阳性血浆凝固酶实验注意事项血浆多挑几环（一滴的量）；菌落不能太多。要做阴性对照，有一部分葡萄球菌有自凝现象。最好用抗凝的兔血浆，兔血浆凝块结实，凝固速度快；兔血浆应放4℃冰箱保存。意义：血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标，致病性葡萄球菌为阳性。链球菌溶血素链球菌溶血

4、素O（SLO）链球菌溶血素S（SLS）抗原性强，产生抗O抗体，该抗体在感染链球菌2-3周至病后1年内可检出；正常参考值：成人<200U风湿热患者抗O抗体250单位以上（高于正常人），活动期在400单位以上；抗O试验常用于链球菌新近感染或风湿热的辅助诊断氧敏感氧稳定三、抗链球菌溶血素“O”试验（抗“O”试验，ASO）抗链球菌溶血素“O”（ASO）胶乳凝集法高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平的抗体后，还有多余ASO(抗O抗体)，这些多余抗体即与ASO胶乳试剂(溶血素“O”与聚苯乙烯胶乳共价交联的产物)反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。原理：阴性对照待测血清各加溶血素“O

5、”1滴轻摇1min再加ASO胶乳1滴轻摇3min观察结果方法：抗“O”抗体溶血素“0”ASO胶乳抗“O”试验操作步骤：1.在反应板上标记好反应区域；2.分别在相应区域加：阴性对照1滴，待测血清一滴；3.再各加一滴溶血素“O”，轻轻摇动1min，使其充分混匀。4.再滴加ASO胶乳试剂1滴于每格内，轻摇3min，观察结果。抗“O”试验结果：阴性对照无凝集；待测血清凝集出现ASO>200IU/ml阳性无凝集出现ASO<200IU/ml阴性注意事项：1.试剂使用前先预置达室温，且要摇匀。2.加试剂时，要保证液滴大小一致。3.试剂盒贮存于2-10℃，切勿冰冻。抗“O”试验意义1.

6、抗体滴度＞200IU/ml以上，新近有可能反复感染过乙型溶血型链球菌2.作为风湿活动期、风湿性关节炎、风心病、急性肾小球肾炎的辅助诊断。思考题临床协助风湿热诊断常采用试验，活动性风湿热患者血清中该抗体一般超过。鉴定葡萄球菌有无致病性的重要指标是。作业1、绘出常见病原性球菌形态图2、记录抗“O”实验结果并分析谢谢