抗菌药物敏感性试验的方法与细菌耐药检测数据.ppt

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1、抗菌药物敏感性试验的方法与细菌耐药检测数据盛京医院：张智洁2016.4.20一、细菌的药敏试验纸片扩散法稀释法肉汤稀释法（常量、微量）琼脂稀释法E-test法1.纸片扩散法接种物的准备：纯菌落，2ml无菌生理盐水，0.5麦氏浊度纸片扩散法接种平板：MH平板，菌悬液在15分钟内划平板，用无菌棉签，3个60度，1圈，15分钟内贴纸片。纸片扩散法贴纸片：手工，纸片分配器孵育：(35±2）℃，空气或CO2纸片扩散法结果纸片扩散法的特点简便，便宜，不同层次实验室均可正规操作，是目前推荐的临床试验室使用方法。检测的是抑菌环直径（mm)2.肉汤稀

2、释法药液的准备：256μg/ml1286432……0.250.1250.0613个梯度菌液的准备：0.5麦氏浊度=108CFU/ml稀释100倍成106，取10μl=104CFU接种:特点：工作量大，适用于菌量少，药物种类少的情况结果MIC：最小抑菌浓度，抑制细菌生长的最小浓度单位：μg/ml0.060.1250.250.51248163264128256宏量肉汤稀释法（每管含药肉汤含量为2～5ml）微量肉汤稀释法（每孔含药肉汤含量为0.1ml）3.琼脂稀释法药物在琼脂中，做成平板。菌量：每点接种10μl=104CFU特点：菌株多时

3、做MIC较方便结果：平板上是否出现肉眼可见的菌落8μg/ml4μg/ml2μg/mlMIC法的总体特点较繁琐，但更准确，主要用于科研，测量的是MIC(μg/ml)旧:纸片扩散法新:微量肉汤稀释法(商品化)4.E-test以纸片扩散法的操作方法获得MIC值的一种药敏试验。操作上有纸片扩散法的优点，结果准确性可与稀释法媲美。缺点：昂贵结果五、药敏结果的判读MIC值或抑菌环直径药物的临界浓度（CLSI、EUCAST、FDA)临界浓度:又叫折点（breakpoint）。即根据抗菌药物抑制细菌生长所需要的MIC结合常用剂量时在人体内所能达到的

4、血药浓度划分细菌对各种抗菌药物敏感和耐药的界限。比较药敏判定折点(BREAKPOINT)纸片法获得的抑菌圈直径23MM稀释法或E-test法获得的MIC值为4mg/LCLSI上查得头孢哌酮对大肠杆菌的折点为：R<=15mm,S>=21mmSCLSI上查得头孢哌酮对大肠杆菌的折点为：R>=64mg/L,S<=16mg/LSeg.（头孢哌酮vs大肠杆菌）结果解释敏感（susceptible）：表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在感染部位达到的药物浓度所抑制或杀灭，感染被治愈。中介(intermediate):指药物在体内生理浓集的部位

5、或允许加大药物剂量治疗时有效；该范围还作为一缓冲区，避免由于微小技术误差导致的结果错误解释。耐药（resistant）：表示测试菌不能被在体内感染部位所能达到的抗菌药物浓度所抑制，治疗无效。盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据盛京医院2015年统计数据