抗菌药物敏感性试验和细菌耐药性检查课件

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1、临床医学五年制实验诊断学许建成讲师一、标本采集和运送二、检测方法三、临床感染常见病原学实验诊断四、抗菌药物敏感性试验和细菌耐药性检查五、医院感染的实验诊断一、标本采集和运送1.基本原则2.各论标本采集和运送基本原则1.采集的标本无外源性污染2.标本在应用抗菌药物或伤口局部处理前收集3.采集后及时送检4.不要在标本中添加任何防腐剂5.在检验申请单上医生应提供患者的临床资料标本采集和运送各论1.血液标本2.CSF与其他无菌体液标本3.尿液标本4.呼吸道标本5.粪便标本6.泌尿生殖道标本7.创伤、组织和脓肿标本1.

2、血液标本采集时间：发热初期和高峰期(≥38℃）或低温（≤36℃）已用抗菌药物治疗者，在下次用药前采集采血量：成人5～10ml/次，婴儿和儿童1～2ml/次采集次数：24小时内收集2～3次采血部位：多次采血时应在不同的部位采集2.CSF与其他无菌体液标本第一管（第二管）做微生物培养运送：用带盖的无菌容器立即送检培养：接种前应离心取沉淀或做增菌培养3.尿液标本中段尿：最常用清洁外阴、包皮消毒尿道口留取中段尿肾盂尿采集法耻骨上膀胱穿刺术留置导尿管取尿法应在用药前或停药5d后留取标本，并使尿液在膀胱中停留6～8h以上

3、4.呼吸道标本1.自然咳痰法：以清晨第一口痰为宜，留出气管深处痰液2.支气管镜采集法：不宜接受3.气管穿刺法：厌氧菌培养4.鼻咽拭子应在用药前或停药1d后留标本对较粘稠的标本，用胰蛋白酶消化后再接种5.粪便标本1.自然排便法：取含脓、血或粘液的粪便根据细菌种类选用合适运送培养基2.直肠拭子法7.创伤、组织和脓肿标本创伤：首先清除污物，消毒皮肤开放性脓肿：取脓液及病灶深部分泌物封闭性脓肿：穿刺抽取厌氧培养二、检测方法（一）直接显微镜检查（二）病原体分离、培养和鉴定（三）病原体抗原检测（四）病原体核酸检测（五）病

4、原体抗体检测（六）细菌毒素检查（一）直接显微镜检查1.不染色标本镜检2.染色标本镜检1.不染色标本镜检1）普通光学显微镜检查：悬滴法或压滴法——观察细菌动力2）暗视野显微镜检查法：检查细菌动力及螺旋体形态和运动3）电子显微镜检查：观察病毒2.染色标本镜检单染色复染色Gram染色抗酸染色特殊染色鞭毛染色荚膜染色细胞壁染色异染颗粒染色芽孢负染色意义：观察病原体形态、染色性、特殊结构，宿主细胞内包涵体革兰染色抗酸染色2.染色标本镜检单染色复染色Gram染色抗酸染色特殊染色鞭毛染色荚膜染色细胞壁染色异染颗粒染色芽孢负

5、染色意义：观察病原体形态、染色性、特殊结构，宿主细胞内包涵体2.染色标本镜检1）单染色2）复染色①Gram染色②抗酸染色3）特殊染色①鞭毛染色②荚膜染色③细胞壁染色④异染颗粒染色⑤芽孢4）负染色意义：观察病原体形态、染色性、特殊结构，宿主细胞内包涵体二、病原体分离、培养和鉴定1.培养基的选择2.细菌培养方式3.接种技术4.鉴定（二）、病原体分离、培养和鉴定1.培养基的选择2.细菌培养方式3.接种技术4.鉴定2.细菌培养方式1.需氧培养：最常用的培养方式，适用于需氧菌和兼性厌氧菌2.CO2培养：5%-10%CO

6、2,适用于苛氧菌3.厌氧培养：适用于专性厌氧菌4.微需氧培养：幽门螺杆菌、空肠弯曲菌（二）、病原体分离、培养和鉴定1.培养基的选择2.细菌培养方式3.接种技术4.鉴定3.接种技术1）液体接种法2）划线接种法3）平板划线法4）斜面划线法5）穿刺接种法6）穿刺划线法7）倾注培养法（二）、病原体分离、培养和鉴定1.培养基的选择2.细菌培养方式3.接种技术4.鉴定4.鉴定1）培养特征：菌落性状（大小、色泽、气味、边缘、光滑度、色素、溶血情况等）2）细菌的形态、染色性3）生化反应4）血清学鉴定5）动物学试验4.鉴定1）

7、培养特征：菌落性状（大小、色泽、气味、边缘、光滑度、色素、溶血情况等）2）细菌的形态、染色性3）生化反应4）血清学鉴定5）动物学试验4.鉴定1）培养特征：菌落性状（大小、色泽、气味、边缘、光滑度、色素、溶血情况等）2）细菌的形态、染色性3）生化反应4）血清学鉴定5）动物学试验4.鉴定1）培养特征：菌落性状（大小、色泽、气味、边缘、光滑度、色素、溶血情况等）2）细菌的形态、染色性3）生化反应4）血清学鉴定5）动物学试验（三）病原体抗原检测用已知抗体检测标本中未知的病原体抗原方法：免疫荧光法、酶免法、化学发光法、

8、乳胶凝集试验病原体抗原包括细菌菌体抗原、鞭毛抗原、毒素、侵袭性酶、病毒的衣壳蛋白、包膜抗原（四）病原体核酸检测检测技术：PCR、DNA探针杂交技术应用于尚不能分离培养或很难分离培养的微生物检测（五）病原体抗体检测用已知病原体抗原检测患者血清中相应抗体常用方法：凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、间接免疫荧光技术、放射免疫测定、ELASA三、临床感染常见病原学实验诊断1.细菌感染检查2.真菌感染检查3.