缩骨鲫(Carassius auratus sogu var.)MC4R克隆、组织分布以及与生长相关SNPs的筛选.pdf

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1、第48卷第4期2017年7月海洋与湖沼OCEANOLOGIAETLIMNOLOGIASINICAVr01．48．NO．4Jul．，2017缩骨鲫(Carassiusauratussoguvar．)MC4R克隆、组织分布以及与生长相关SNPs的筛选木杨扬1周惠强1舒琥1①蓝昭军2李强1谷平华2(1．广州大学生命科学学院广州510006；2．韶关市水产研究所韶关512006)摘要黑色素皮质素受体．4(Melanocortinreporter．4，MC4R)是G蛋白偶联受体超家族成员，在能量调控中发挥重要作用。本实验

2、采用同源克隆以及染色体步移对缩骨鲫(Carassiusauratussoguvar．)MC4R基因进行克隆，对其核苷酸序列和推测的氨基酸序列进行生物信息学分析，通过Real．timePCR对其mRNA组织分布进行研究，并对缩骨鲫MC4R编码区潜在的与生长相关的SNPs进行筛选。本实验克隆MC4R基因组基因长度为2854bp，只包含一个外显子，长度为98lbp，共编码326个氨基酸，MC4R共有七个跨膜结构，是较为稳定的疏水蛋白。缩骨鲫MC4R与鲫鱼的MC4R氨基酸序列的同源度最高达到99．3％，与MC3R和MC

3、5R同源度相对其他MCRs成员较高。缩骨鲫MC4RmRNA在脑中表达量最为显著，眼中次之，肌肉，卵巢和肾脏中表达较少，在鳃、肠、心脏和肝胰腺中微量表达。在MC4R的CDs区内检测到6个与生长潜在相关的SNPs：两个错义突变(A199G和A881C)，4个同义突变(A123G，C231T，A444G和C480T)。本实验可为缩骨鲫生长和发育的分子机制研究以及遗传育种提供基础资料。关键词黑色素皮质素受体一4(MC4R)；缩骨鲫；克隆；组织分布；单核苷酸多态中图分类号Q953；$917．4doi：10．11693／l

4、ayhz20170100025黑色素皮质素受体．4(melanocortinreporter．4，MC4R)属于黑色素皮质激素受体(melanocortinreporters)家族，是G蛋白偶联受体超家族成员，具有7个跨膜结构，为典型的视紫红质受体蛋白(Jangpraietal，2011)。黑色素皮质素受体与其配体一阿黑皮素原(POMC)的衍生物所组成的黑色素皮质素系统在生物体代谢调控和能量平衡中扮演着重要的角色(Ellacottetal，2004)。MC4R是该系统中的重要组成部分，其功能十分广泛，与能量代谢

5、(Ellacottetal，2004)、食物摄入(Bertileetal，2006)、性行为(VanderPloegetal，2002)以及疼痛感触(Vrintenetal，2000)均有关联。MC4R可接受多种受体，它可以受到a—MSH的激活，促使生物体加快代谢，抑制进食，抑制体重增长；也可以受到刺鼠蛋白(agouti)，刺鼠相关蛋白(AGRP)12．义及神经肽Y(NPY)的抑制，抑制生物体代谢，促进生物体觅食，减缓体重降低(左北瑶等，2011)。在人类中，MC4R的突变可以引起肥胖症(Vaisseetal,

6、1998)。有统计显示，有4％的肥胖患者都是由于MC4R基因突变引起的(Frogueletal，2000。在小鼠中敲除该基因，小鼠表现出多食、肥胖、胰岛素分泌过多等症状(Huszaretal，1997)。由于MC4R在能量调控中发挥的重要作用，在疾病治疗和农业方面，MC4R受到越来越多的关注。MC4R作为一种脑神经受体主要分布于脑中，在其他组织内也有着不同程度的分布。MC4R的组织表达在哺乳动物和家禽有着较多的研究。Mounfioy等(1994)通过原位杂交技术对大鼠脑内MC4R的表达进行检测，结果显示MC4R

7、在皮质、丘脑、下丘脑、脑+国家公益性行业(农业)重大专项，201303048号；广东省自然科学基金项目，2015A0303135092号；广东省科技计划项目，2014A020208145号。杨扬，E—mail：214453598@qq．corn①通讯作者：舒琥，博士，教授，E-mail：shuhu001@126．com收稿日期：2017-01—29，收修改稿日期：2017-03—044期杨扬等：缩骨鲫(Carassiusauratussoguvar．)MC4R克隆、组织分布以及与生长相关SNPs的筛选831干和

8、脊髓内均有表达。王婕等(2011)对鸭的MC4R基因的组织表达差异进行了分析，结果显示，肌肉、脂肪、心脏、肾脏、脾脏和脑中均有不同程度的表达。在鱼类中，MC4R的组织表达在齐口裂腹鱼(Schizothoraxprenati，Weietal，2013)，金鱼(Cauratusvar．，Cerdfi—Reverteretal，2003)，虹鳟(Oncorhynchusmykiss，Hait