甲基对硫磷对金鱼(carassius auratus)的抗雄类雌激素效应研究

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1、谨以此论文献给支持并给予我正能量的所有人-----------王汝平万方数据甲基对硫磷对金鱼(Carassiusauratus)的抗雄/类雌激素效应研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：万方数据独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论

2、文作者签名：签字日期：年月日-------------------------------------------------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。

3、同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日万方数据甲基对硫磷对金鱼(Carassiusauratus)的抗雄/类雌激素效应研究摘要甲基对硫磷(O，O-dimethylO-4-nitrophenylphosphorothioate,methylparathion)是一种有机磷农药，能够引起大鼠睾丸、前列腺

4、、附睾、贮精囊等器官重量降低，硬骨鱼类精子数量减少、畸形率上升等一系列生殖损伤，而生殖系统功能的维持与生殖细胞的发生都和内分泌系统密切相关。因此，本文以性成熟金鱼为研究对象，利用多个指标评价了甲基对硫磷暴露对金鱼的抗雄/类雌激素效应以及诱导的生殖损伤。其中，以性腺指数(gonadosomaticindex,GSI)和性腺组织学观察分析甲基对硫磷对金鱼的生殖损伤；以雄激素睾酮(testosterone,T)、雌激素17β-雌二醇(estradiol,E2)分泌、血浆卵黄原蛋白(vitellogenin,Vtg)生成、以及雄激

5、素受体(androgenreceptor,AR)、雌激素受体(estrogenreceptors,ERs)和芳香化酶(cytochromeP450aromatase,CYP19/P450arom)mRNA等探讨甲基对硫磷诱导生殖毒性的抗雄/雌激素效应。(1)0.001、0.01、0.1mg/L甲基对硫磷对雄性金鱼暴露21d后，采用放射免疫分析法(radioimmunoassay,RIA)测定血浆E2、T含量，同时采用实时定量PCR方法检测了肝脏VtgmRNA、性腺P450aromAmRNA、肝脏和性腺AR基因表达水平。结果

6、表明：甲基对硫磷对肝脏VtgmRNA的表达影响不显著，也没有诱导血浆Vtg的生成，但0.01、0.1mg/L甲基对硫磷诱导血浆E2、T含量，性腺P450aromA，肝脏、性腺AR表达水平显著下降，说明甲基对硫磷对雄鱼表现出抗雄激素效应。(2)0.001、0.01、0.1mg/L甲基对硫磷暴露雌性金鱼21d，采用RIA检测了血浆E2含量，同时采用实时定量PCR方法检测了肝脏和性腺中ERs(ERα和ERβ)表达水平。所得结果与雄鱼存在差异：雌鱼血浆E2含量显著上升，0.001、0.01mg/L处理组性腺ERβ及肝脏ERα、ER

7、β的表达水平显著上调，说明甲基对硫磷可能对雌性金鱼表现出类雌激素效应。(3)0.001、0.01、0.1mg/L甲基对硫磷暴露雄鱼21d，导致雄鱼GSI显著下降；精巢组织切片观察发现0.01、0.10mg/L甲基对硫磷导致精原细胞、Leydig氏细胞出现轻微肿胀，小叶间质扩大，基膜溶解、精子数量明显减少，个别精小叶I万方数据内出现了生精细胞团的混乱。本研究认为雄鱼血浆T含量、性腺AR表达水平的显著下降是导致以上生殖损伤的直接原因。(4)甲基对硫磷暴露雌鱼21d导致GSI极显著上升，本研究认为甲基对硫磷发挥类雌激素效应诱导雌

8、鱼血浆E2含量上升，最终导致卵巢异常增重，GSI上升。综上所述，本文从组织/器官水平、蛋白水平、分子水平等方面探究了甲基对硫磷对雄/雌性金鱼的抗雄/类雌激素效应以及所诱导的生殖毒性，发现甲基对硫磷对雄/雌性金鱼产生了不同的内分泌干扰效应：(1)甲基对硫磷能够显著降低雄性金鱼血浆T含量，肝脏、性腺AR与性