双酚a对鲫鱼（carassius auratus）肝脏生殖相关基因表达和血清性激素水平的影响

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1、上海海洋大学硕士学位论文双酚A对鲫鱼（Carassiusauratus）肝脏生殖相关基因表达和血清性激素水平的影响姓名：李惠云申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：魏华20080606上海海洋人学硕十学位论文双酚A对鲫鱼(勖阳ssi比s伽m伽s)肝脏生殖相关基因表达和血清性激素水平的影响摘要内分泌干扰物(endocrinedisnlptingchemicals，EDCs)是指干扰生物体正常的内分泌机能，并影响生物体或其后代发育、繁殖和行为的外源性化学物质，由于它往往具有类雌激素作用，故又称为环境雌激素(ecoestrogen)。EDCs对人类和野生生物的有害

2、影响引起了许多国际组织和世界各国政府及公众的关注，成为本世纪生命科学和环境科学的重大议题之一。双酚A(bisphen01．A，BPA)是生产聚碳酸树脂和环氧树脂的重要原料。由于BPA在食品包装材料上的广泛使用，它的安全性问题受到极大关注。研究表明BPA是一种内分泌干扰物。水域环境是EDCs最后的归宿点，鱼类和其它水生动物已受到EDCs的损伤是不争的事实，但对EDCs在水生动物体内的作用生理过程远未认识清楚。本论文研究了以双酚A为代表的内分泌干扰物对典型淡水鱼类鲫鱼的内分泌干扰作用。主要研究内容如下：1．BPA对雌鲫肝脏VTG、ERa和CYPlAlmRNA表达的影响

3、以不同浓度的BPA(质量分数分别为1m舭g，50mg／l(g，100mg／l(g(注射剂量／鱼体重))对雌鲫进行腹腔注射，分别于24h和48h检测肝脏中的卵黄蛋白原(vitellogenin，VTG)mRNA、a型雌激素受体(estrogenreceptor，ERa)mRNA和细胞色素CYPlAl(cvtochromeP4501A1，CYPlAl)mRNA表达水平的变化情况。旨在探讨BPA对鲫鱼的内分泌干扰过程。结果发现：1m眺g处理组VTGmRNA水平在48h内没有明显变化；50m眺g与100mg／l(g处理组VTGmRNA水平在24h内没有明显差异，至48h显

4、著上升。说明BPA具有雌激素效应，但对雌鲫VTG的诱导需要较高的剂量以及较长的作用时问。1m班g和50m眺gBPA处理组ERamRNA水平与对照组相比在48h内均没有明显变化；100m眺gBPA处理组ERamRNA水平在注射后24h显著上调(P<0．05)，48h时仍维持较高水平。结果表明雌鲫肝脏ERamRNA水平只有在最高浓度组上海海洋人学硕十学位论文(100m眺g)中显著上升。另外，1m班g处理组CYPlAlmRNA水平在24h显著上升(P

5、48h均没有明显变化。肝脏ERamRNA只有在最高浓度组(100mg／l(g)中被显著诱导，而CYPlAlmRNA水平仅在最低浓度组(1m眺g)中短期内显著上升。由于ERamRNA的表达受ER介导，而CYPlAl的表达受芳烃受体(AhR)介导，因此推测BPA在高、低浓度下其作用机制可能不同，低浓度时通过诱导CYPlAlmRNA的表达从而提高对内源性和外源性化合物的代谢，高浓度时可通过ERa途径实现雌激素效应效应。另外，值得注意的是，B蝴寸雌鲫VTG的诱导需要较高的剂量以及较长的作用时间，而CYPlAlmRNA恰恰相反，其水平只有在最低浓度的BPA作用下短期内显著上

6、升。由于CYPlAl对性类固醇激素雌二醇(E2)具有羟化作用能促进E2代谢，而E2在鱼类VTG水平中起着重要的调控作用。因此，为了更好地阐明BPA的内分泌干扰作用，有必要对BPA与鱼类性固醇激素水平的关系进行研究。2．双酚A对鲫鱼血清性类固醇激素水平的影响以不同浓度的BPA(质量分数分别为1m眺g，50m班g，100mg／l(g(注射剂量／鱼体重))对鲫鱼进行腹腔注射，分别于24h和48h检测雌、雄鲫鱼血清雌二醇(17B—eatradiol，E2)和睾酮(testosterone，T)水平的变化。结果显示：1mg／l(gBPA处理24h后，雌鲫血清E2浓度有显著下

7、降，而50m班g和100mg／l(gBPA处理组E2浓度均显著增加，表现为低浓度BPA暴露导致血清E2水平下降、高浓度BPA导致E2水平上调。这种现象可能是BPA高低浓度下对E2代谓}的影响不同造成的。由于E2下降的同时伴随着CYPlAlmRNA水平的上升，而CYPlAl能促进E2代谢从而降低E’水平，从而为这种推测提供了依据。雌鲫血清T水平在整个实验过程中没有出现显著变化。可见，雌鲫血清E2对BPA的敏感性比T强。而对于雄性鲫鱼，BPA的雌激素效应表现为诱导血浆E2水平上升，并使T水平下降，但BPA各处理组的性激素水平波动较大，不同浓度处理组之间变化趋势不一致。

8、以上结果表