管角螺遗传多样性的AFLP分析.pdf

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1、第43卷第4期2013年4月中国海洋大学学报PERI()DICALOFOCEANUNIVERSlTYOFCHINA43(4)：058～062Apr．．2013管角螺遗传多样性的AFLP分析。潘英1，慕翠敏2，李琪2，苏翔驹1，区小玲1，何俊锋1，吴雪萍1，陈德金1(1．广西大学动物科技学院，广西南宁530004；2．中国海洋大学水产学院，山东青岛266003)摘要：近年来，由于对管角螺的捕捞强度加大，其自然资源大大减少。为进一步了解管角螺的遗传变异和群体结构状况，本文首次利用AFLP(Amplified

2、fragmentlengthpolymorphism，扩增片段长度多态性)分子标记技术对我国南方沿海管角螺5个地理群体(连云港、温州、台山、湛江、防城港)进行遗传多样性分析。采用2对AFLP引物组合对管角螺5个群体的150个个体进行扩增，共扩增出310个位点，多态位点277个，多态位点比例为89．35％，基因多态性分别为0．3824、0．4766、0．3938、0．4374和0．3928，说明5个群体的遗传多样性存在一定的差异。群体问及群体内遗传分化指数表明，管角螺5个地理群体的遗传变异主要来自于群体内

3、个体问，而群体间无明显的遗传分化。UPGMA(t}}Jtl权组对平均法)系统树分析表明，湛江和防城港群体间的亲缘关系较近，而台山和温州群体间的亲缘关系较远。关键词：管角螺；地理群体；AFLP；遗传多样性中图法分类号：Q953文献标志码：A文章编号：1672—5174(2013)04—058—05管角螺(Hemifusustuba)隶属于软体动物门(Mollusca)，腹足纲(Gastropoda)，盔螺科(Galeodi-ae)，角螺属(Hemifusus)，俗称角螺、响螺、海螺、号螺，为热带和亚热带浅

4、海暖水性较大型的经济腹足类。在我国主要分布在江苏、浙江、福建、广西、广东和海南等省的沿海地区。近年来，由于捕捞强度加大，其自然资源大大减少。了解管角螺的遗传结构和种质资源状况，对确保我国管角螺种质资源的合理利用具有重要的现实意义。目前，国内外有关角螺的研究主要集中在管角螺的摄食、繁殖、摄食及饥饿对其幼体的影响、幼螺生长及种内残杀[1。3]、呼吸和循环方面的动力学[41；国内主要在繁殖发生[5。9

5、、人工育苗[1¨1

6、、生态习性[1213]、营养成分分析‘14-161和生化代谢[17-20]、染色体核型[

7、21]、角螺属齿舌形态的比较[22]等方面。当前有关管角螺种群遗传学研究，仅见形态差异用于区分管角螺不同地理种群间的研究报道[23

8、，以及利用RAPD分子标记对管角螺不同地理群体进行研究[24】。我国管角螺的主要地理群体的遗传基础背景依然模糊，缺乏对中国沿海管角螺种质资源状况的全面了解。本研究采用AFLP技术首次对我国南方沿海管角螺的遗传变异进行分析，为开展管角螺人工繁育和资源保护提供遗传背景资料。1材料与方法1．1材料图1管角螺样品采集地点Fig．1SamplesitesofH．tubaalongth

9、ecoastofChina本实验选用的管角螺5个地理群体样品分别于*基金项目：国家自然科学基金项目(31060353)；广西科技攻关项目(11107012—9)；南宁市科技开发计划项目(201102045B)；广西海洋生物技术重点实验室开放基金项目(GLMBT-201201)资助收稿日期：2012—04—1l；修订日期：2012—08—27作者简介：潘英(1968一)，教授，博导，从事海洋贝类遗传育种研究。E-mail：nnpying@sohu．corn4期潘英，等：管角螺遗传多样性的AFLP分析200

10、7年11月采集于广东湛江(ZJ)、浙江温州(WZ)，2008年3月采集于江苏连云港(LYG)，2008年8月采集于广东台山(TS)与广西防城港(FCG)自然海区。样品的采集地点见图1。所取样品均活体运输到实验室，每个群体随机抽取了30个个体作为研究对象，解剖取腹足肌，置无水乙醇于--20oC中保存，用于DNA提取。1．2方法1．2．1基因组DNA的提取及检测取冷冻样品约50～100mg腹足肌肉组织并切成接近粉末状，采用CTAB法E25]并稍加改进抽提基因组DNA，TE缓冲液溶解，1．5％的琼脂糖凝胶电泳

11、检测DNA浓度及纯度，并稀释到100ng／p．L，一20℃保存用于AFLP实验。1．2．2AFLP分析PCR选择性扩增反应在预实验中使用了4种EcoRI引物和4种MseI引物共16对引物组合。根据预实验结果，从扩增带数目适中、条带清晰、多态性高的引物组合中选取了E-AGG／M-CTG和E_AAG／M—CTG这2对引物组合，对管角螺5个地理群体进行AFLP分析，实验方法参照Kong等E26]的方法。扩增产物在6％的变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离