海洋来源链霉菌M1O抗白色念珠菌活性物质研究.pdf

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1、第32卷第2期2013年5月应用海洋学学报JournalofAppliedOceanographyV01．32．No．2May，2013海洋来源链霉菌M1O抗白色念珠菌活性物质研究矫文策1，王玉梅1，陈超1，董莉2，方玲玲1，万春1，赵心清1(1．大连理工大学生命科学与技术学院，辽宁大连116023；2．大连理工大学医院，辽宁大连116023)摘要：对从大连海域沉积物样品中分离得到的海洋放线菌进行活性筛选，获得了1株对白色念珠茵具有良好拮抗活性的菌株MIO．基于16SrRNA的系统发育分析表明，M10菌株与分离自植物根际土

2、壤的模式菌种摩洛哥链霉菌(Streptomycesmarokkonensis)DSM419181的亲缘关系最近．对M10菌株的发酵产物进行活性追踪，M10菌株拮抗白色念珠茵的活性物质存在于乙酸乙酯相中，在低于60℃时具有较好的热稳定性，在pH值介于3～8之间具有良好的酸碱稳定性，但pH值升至9～12时活性明显下降．采用溶剂萃取、柱色谱层析及制备HPLC等方法对M10菌株发酵液中的有机相活性物质进行了分离，得到2种纯化合物A和B，其最小抑茵浓度分别为0．125、0．250¨g／em3；红外光谱分析表明A和B组分可能是不饱和酮

3、酯类和不饱和苯衍生物．本文首次报道了海洋来源的摩洛哥链霉菌近缘菌株抗白色念珠茵活性物质的分离纯化，可为进一步开发利用海洋来源的新型抗真菌药物库提供参考．关键词：微生物学；海洋来源链霉菌；摩洛哥链霉茵；白色念珠茵；活性物质；分离纯化DOI：10．3969／J．ISSN．20954972．2013．02．008中图分类号：Q178．53文献标识码：A文章编号：2095-4972(2013)02-0199-07放线菌是多种抗生素的主要生产菌．近年来，由于过度开发和新的分离筛选方法的局限性，从陆生放线菌中得到的新活性化合物明显减少

4、，而海洋独特的环境(高压、高盐、低温、寡营养等)使海洋放线菌成为结构新颖的天然产物的重要来源¨圳．大连海域具有广阔的海岸线，蕴藏着丰富的放线菌资源．本实验室自2006年以来对大连海域放线菌菌种资源和基因资源进行了研究，发现了多株海洋来源链霉菌菌株具有抗细菌、抗真菌及神经保护活性等多种活性。5‘7o，并鉴定了1株链霉菌新菌种，命名为星海链霉菌坤j，还对几株链霉菌的基因组序列进行了测定和分析，揭示了其合成不同抗生素的潜能一。⋯．这些研究结果表明大连海域的海洋来源的放线菌资源具有重要的研究和开发价值．白色念珠菌(Candidaa

5、lbicans)是引起免疫低下宿主感染的重要条件致病真菌．尽管目前有相关抗真菌药物的治疗，但临床耐药菌的不断发现迫切需要开发新的抗生素用于耐药菌的治疗⋯J．本文报道了对海洋放线菌M10抗白色念珠菌活性产物的分离纯化和结构的初步研究，以期为开发新型拮抗抗生素奠定基础．1材料和方法1．1海洋放线茵的分离和鉴定1．1．1样品的采集和菌株分离海洋来源链霉菌M10分离自大连周边海域水下10m深处的沉积物样品中．样品采集后用冰盒保存并立即在实验室进行分离，样品稀释6个梯度并均匀涂布在Bennett培养基u2’上，在28。C培养7d后挑

6、单菌落于TSB固体培养基(美国DB公司产品)一31中进行培养，置于甘油管中保藏，并于一80c

7、C冻存．1．1．2培养基Bennett固体培养基、TSB种子培养基的配制按参考文献[13]进行．M10菌株发酵培养基的组分：淀粉20g，豆粉25g，葡萄糖10g，酵母粉4g，牛肉膏1g，蛋白胨2g，NaCl2g，K：HPO。0．5g，CaCO，5g，蒸馏水l000em3，pH值为7．2，于115qC灭菌20min．1．2菌种鉴定1．2．1形态观察和生理生化实验根据放线菌分类和鉴定手册中的方法¨41进行形态观察和生理生收稿日期：20

8、12-ll-08基金项目：华东理工大学生物反应器国家重点实验室基金资助项目作者简介：矫文策(1983～)，男，博士研究生；E-mail：wencejiao—dlut@yahoo．eom．cn通讯作者：赵心清(1972～)，女，教授，博导；E—mail：xqzhao@dlut．edu．cn·200·应用海洋学学报32卷化实验．1．2．216SrRNA的序列分析采用细菌通用引物对MIO菌株基因组DNA进行16SrDNA全长的PCR扩增．PCR产物的测序委托大连宝生物公司进行，所得到的序列提交GenBank数据库进行比对，获得的

9、登录号为JX397876．通过Blast搜索和Clust—alX多序列比对后采用Mega4．0软件，用Neighbor—Joining法建立系统发育树，确定M10菌株的系统发育地位．1．3抗茵活性实验1．3．1测试茵和培养基测试菌白色念珠菌(c．albicans)购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(CG